郑学芝 徐秋玲 郭 冉 孙 健 王文婷

    牡丹江医学院生理学教研室，黑龙江牡丹江 157011

    中药夏枯草具有散结、明目、清火、消肿、抗肿瘤等作用，所含化学成分包括三萜类(熊果酸、齐墩果酸)、黄酮类、香豆素类、有机酸类、糖类、挥发油类等。其中夏枯草提取物的抗肿瘤作用表现在抑制肿瘤细胞增殖、促进凋亡、诱导分化、逆转肿瘤耐药、抑制新生血管生成、抗突变等多方面。但传统中药抗肿瘤具有药物生物利用度低、起效慢、疗程长等特点，影响了其在临床上的应用。因此需要探究能增强夏枯草抗肿瘤疗效的方法。食管癌是严重危害人类健康的消化系统恶性肿瘤之一，其发生发展与多基因表达异常有关，所以研究致癌相关基因并加以干预具有重要意义。Survivin 基因在多种肿瘤的发生发展中发挥作用，参与调控细胞凋亡和细胞周期，是最强的凋亡抑制因子之一，下调Survivin 基因表达可以促进肿瘤细胞的凋亡，Survivin 基因参与调控食管癌ERK 信号传导通路，Survivin 蛋白表达与食管癌分化程度和TNM 分期有关，故推测Survivin 基因可能对食管癌细胞的恶性增殖发挥重要作用。但临床实践表明，单独干预一个基因不能起到稳定持久的抗癌效果。所以本研究设计将中药夏枯草三萜类提取物与Survivin基因靶点干预联合应用，探究从调控基因表达角度，能否起到优化夏枯草抗食管癌疗效的作用及可能性，观察中药夏枯草三萜类提取物联合Survivin-siRNA对食管癌Eca-109 细胞增殖抑制、凋亡诱导作用的影响，研究两种治疗方法对食管癌Eca-109 细胞是否具有协同抑制作用，Survivin-siRNA 能否增强夏枯草的抗肿瘤敏感性，进一步探究夏枯草抗食管癌机制，为临床食管癌中医药治疗提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 仪器与试剂

    食管癌Eca-109 细胞：购自原中科院上海细胞所，传代培养后由牡丹江医学院科研中心保存；夏枯草三萜类提取物：利用大孔树脂法得到三萜类成分，用95%乙醇溶解，配成生药浓度为100 mg/ml 的夏枯草提取液，夏枯草购自广东汇群中药饮片公司(货号：粤20160301)；RPMI1640 培养基(货号：22400-0089)、胎牛血清(货号：10270-106)、胰蛋白酶(货号：25200-056)：购自Gibco 公司；RT-PCR 试剂盒(货号：RR037A)：购自takara 公司；Trizol(货号：R0016)、BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号：P0011)、Survivin 抗体(货号：AS792)、GAPDH 抗体(货号：AF1186)：购自碧云天生物技术研究所；Survivin-siRNA B 套餐(货号：A10002)、siRNA-Mate 转染试剂(货号：G04003)：购自Gene Pharma 公司；Annexin-V-FITC/PI 凋亡双染试剂盒(货号：556547)：购自BD 公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗(货号：BA1056)、CCK-8 试剂盒(货号：AR1160)：购自武汉博士德生物工程公司 ......