中医不同治法拮抗大鼠IRI心肌细胞凋亡的分子机制研究(1)
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【摘要】 目的 观察中医不同治法(补气、活血、化痰)对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)诱导细胞凋亡及Caspase-3和NF-κB表达的影响。方法 建立大鼠动脉粥样硬化在体心肌缺血再灌注模型，采用原位末端TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数(AI)，免疫组化、ESMA法观察心肌细胞Caspase-3及NF-κB因子表达。结果 中医不同治法(补气、活血、化痰)均能降低AI；补气法、活血法能够抑制Caspase-3及NF-κB的表达，而化痰法对以上因子的表达无明显影响。结论 中医不同治法(补气、活血、化痰)可能通过不同途径抑制I/R心肌细胞发生凋亡，从而对I/R心肌具有保护作用。
【关键词】 补气法； 活血法； 化痰法； 心肌缺血再灌注损伤； 细胞凋亡； Caspase-3; NF-κB
心血管疾病常发生缺血再灌注损伤，其机制可能是一种多因素参与的复杂病理生理过程，涉及到多个环节。但无论由哪种途径引起的心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury，MIRI)，最终均可导致心肌细胞结构的改变和破坏。为此，笔者在动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)大鼠MIRI模型上，观察中医补气、活血、化痰不同治法对大鼠心肌缺血再灌注后心肌超微结构影响，并观察Caspase-3及NF-κB的表达，从分子水平探讨补气、活血、化痰不同中医治法拮抗MIRI细胞凋亡机理的异同，以期更加客观和直接地揭示中医不同治法的心肌保护效应，为进一步临床应用提供依据。
1 材料与方法
1.1 主要药物与试剂
1.1.1 药物制备给药剂量和给药方式 保元汤、血府逐瘀汤、瓜蒌薤白半夏汤水煎剂按照参考文献[1]制备；保元汤以成人等效量0.95 g生药/kg体重灌胃，血府逐瘀汤以成人等效量1.37 g生药/kg体重灌胃，瓜蒌薤白半夏汤以成人等效量0.59 g生药/kg体重灌胃，给药体积均按1 ml/100 g计算，于缺血再灌注前30 min给大鼠灌胃，缺血再灌注组注入等量生理盐水。
1.1.2 试剂 原位细胞凋亡检测试剂盒、鼠抗Caspase-3单克隆抗体以购自美国sigma公司，NF-κB P65抗体(一抗)和Western blot luminol reagent购自美国satus cruzs公司;辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG(二抗)购自北京中山公司;T4多核苷酸激酶和NF-κB探针购自美国Promega公司；[r-32p]ATP购自北京亚辉公司 ......
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