胃黏膜COX-2\p53表达与Hp感染及癌变的关系研究(1)
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【摘要】 目的：探讨Hp感染组和非感染组CSG、CAG、IM、Dys及GCa胃黏膜的COX-2、p53表达情况，并进行相关性分析。方法：选择经胃镜检查及病理组织学证实为CSG、CAG、IM、Dys及GCa患者各100例，通过快速尿素酶试验(HPUT法)和组织学改良Giemsa染色联合检测Hp，通过免疫组化对Hp感染组和非感染组患者胃黏膜联合检测COX-2、p53。结果：(1)Hp检出率以CAG中的IM最高，其次为Dys及GCa，与CSG比较差异有统计学意义；(2)COX-2蛋白在IM、Dys、GCa均有表达，差异无统计学意义；(3)Hp阳性的胃黏膜病变中COX-2的阳性表达率高于Hp阴性的胃黏膜病变，差异有统计学意义；(4)p53表达的阳性率从CSG、CAG、IM到Dys逐渐增加，GCa时达最高峰；CSG组p53表达的阳性率明显低于CAG组、IM组及Dys组(P<0.01)；GCa组p53表达的阳性率明显高于CAG组、IM组及Dys组(P<0.O5)；(5)Hp阳性组总体p53表达的阳性率明显高于Hp阴性组总体(P<0.05)；在同一病变类型中，Hp阳性组p53表达的阳性率虽均高于Hp阴性组，但两者比较差异无计学意义。结论：Hp感染与胃癌的发生有着密切的关系，并且主要是在胃癌早期起作用；COX-2、p53突变和过表达是胃癌发生的早期事件之一；COX-2的表达上调与Hp感染有关，Hp感染通过介导COX-2的表达上调在胃癌的发生中起作用；临床联合检测Hp、p53、COX-2，对发现胃癌前病变和早期胃癌有一定临床意义。
【关键词】 Hp； COX-2； p53； GCa
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2012.13.008
目前，国内外学者普遍接受Correa提出的胃癌发生多步骤假设，从慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis，CSG)、慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis，CAG)、肠上皮化生(Intestinal metaplasia，IM)、不典型增生(Dysplasia，Dys)到胃癌(Gastric Carcinoma，GCa)的演变过程。幽门螺杆菌(Helicopter pylori，Hp)感染是慢性胃炎的主要病因，与胃癌的发生亦有密切的关系。环氧化酶(cyclooxygenase，COX)是前列腺素(prosta glandins，PGs)合成的限速酶[1]。现已证明，Hp感染诱导胃黏膜COX-2表达，与胃癌的发生关系密切，突变型p53对肿瘤的发生有促进作用[2]。本研究通过免疫组化对Hp感染组和非感染组CSG、CAG、IM、Dys及GCa胃黏膜的COX-2、p53表达进行检测，并进行相关性分析。
1 资料和方法
1.1 一般资料 均为2006年1月-2010年12月因上消化道症状在丽水市人民医院经胃镜检查及病理组织学证实为CSG、CAG、IM、Dys及GCa患者各100例。所有病例均无Hp根除史，4周内无质子泵抑制剂(PPI)、抗菌药物等应用史。各组例数、年龄及性别构成见表1。
1.2 方法
1.2.1 Hp现症感染 应用快速尿素酶试验(HPUT法)和组织学改良Giemsa染色联合检测Hp。二者均为阳性(定为Hp+)，两者均为阴性(定为Hp-)，一阴一阳者不入选研究组。病理检查方法：在胃窦距幽门约5 cm以内区域取3~4块胃黏膜组织进行病理学检查。标本经福尔马林液固定，普通石蜡包埋，4 μm厚度连续切片备用(切片事先用多聚赖氨酸处理)，常规染色以确定病理学诊断。
1.2.2 COX-2、p53的免疫组化染色方法 本实验所用试剂COX-2、p53鼠抗人多克隆抗体，采用链霉素-生物素-辣根过氧化物酶复合物法(SP)免疫组织化学技术。石蜡切片常规脱蜡，水化，取0.01 M柠檬酸型缓冲剂作为修复液进行热修复，冷却至室温，滴加3%H2O2，在室温下孵育10 min。10%正常山羊血清封闭，室温孵育30 min，倾去血清，滴加1：200稀释的COX-2、p53鼠抗人多克隆抗体，4 ℃过夜，滴加生物素标记的第2抗体，在室温下孵育10 min，滴加新鲜配制的DAB溶液显色，苏木素复染，酒精脱水，干燥后封片。
1.2.3 免疫组化结果判定 以PBS替代1抗作为阴性对照，用已知强阳性的结肠癌切片作为阳性对照。阳性反应判定标准：以细胞胞浆中呈现颗粒状棕黄色染色者为COX-2、p53阳性细胞。对每个标本中胞浆阳性的表面上皮和固有腺上皮进行计数，以计数10个高倍视野细胞为准。评价阳性反应，依据每张切片的阳性细胞百分率和阳性反应强度分别进行，阳性着色细胞占10%以上定为阳性表达。阳性反应强度分别用阳性(+)和强阳性(++)表示。
1.3 统计学处理 采用PEMS 3.2 进行统计分析，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Hp感染在各种胃黏膜病变中的表达 不同组织类型中Hp检出率以CAG中的IM最高，其次为Dys及GCa，它们与CSG比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。
2.2 COX-2在不同阶段的表达 COX-2蛋白在IM、Dys、GCa均有表达，它们之间的表达率差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。
2.3 Hp感染与COX-2感染的关系 Hp阳性的胃黏膜病变中COX-2的阳性表达率高于Hp阴性的胃黏膜病变，差异有统计学意义(P<0.01)，见表3。
2.4 p53在各种胃黏膜病变中的表达 p53表达的阳性率从CSG、CAG、IM到Dys逐渐增加，GCa时达最高峰。p53表达阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。CSG组p53表达的阳性率明显低于CAG组、IM组及Dys组(P<0.01)；GCa组p53表达的阳性率明显高于CAG组、IM组及Dys组(P<0.05)，见表4。
2.5 Hp感染与p53表达的关系 Hp阳性组总体p53表达的阳性率明显高于Hp阴性组总体(P<0.05)；在同一病变类型中，Hp阳性组p53表达的阳性率虽均高于Hp阴性组，但两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。
3 讨论
有学者认为，Hp感染作用于胃癌发生的起始阶段而扮演一个“首要推动因子”作用[3] ......
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