LGT不同表达对结直肠癌术后FOLFOX方案巩固化疗的远期生存的分析(2)
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影响结直肠癌患者预后的因素很多，涉及到临床、病理特点、各系统的综合作用等。确定有效的预后参数，能正确估计预后，有助于治疗方案的制定[1]。本研究分析了55例经手术治疗，术后辅以FOLFOX方案巩固化疗的结直肠癌患者，分析LGT不同表达对其巩固治疗后远期生存的影响。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取本科2006年1月-2009年1月收治的首次入院，入院时均进行危重病人预警蛋白(LGT)检测，并行手术治疗的结直肠腺癌患者55例，术后均进行标准FOLFOX方案巩固化疗(奥沙利铂85 mg/m2，d1；亚叶酸钙200 mg/m2，d1、d2；氟尿嘧啶400 mg/m2，静推，d1、d2，600 mg/m2，持续静脉泵入22 h，d1、d2；每两周重复)4～6周期。其中男35例，女20例，中位年龄62岁，入组时均经病理学诊断证实，且排除影响血清蛋白质水平的疾病。以该患者就诊时间(入组时间)为生存时间起点，在2011年8月30日前对上述患者疾病状态(进展与否)及生存状态(死亡与否)通过查阅病历、电话随访的方式获得。
1.2 实验方法 分组：(1)年龄以65岁分组；(2)性别以男女分组；(3)以LGT表达表达与否分组。
实验设备：PBS-Ⅱc表面增强飞行时间质谱仪(SELDI-TOF-MS)、能量吸收分子EMA，CM10型蛋白质芯片及相应分析软件ProteinChip 3.2.0、Biomarker Wizard (美国Ciphergen公司)，HFPFS缓冲盐(Sigma公司)，CHAPS缓冲盐(Sigma公司)。
实验步骤：(1)血清样本处理：血清标本冰浴解冻，10 000 r/min离心2 min。取血清样品5 μl，加10 μl 9 M尿素。振荡30 min，加180 μl缓冲液稀释(100 mmol/L NaOAc pH 4.0)，4 ℃ 10 000 r/min离心2 min，取上清液待用。(2) 芯片处理：将芯片放入盛有100 mmol/L盐酸的试管中，振荡4～5 min，HPLC水冲洗，将芯片安装到Bioprocessor上，每孔加200 μl结合缓冲液，室温振荡5 min，弃掉液体，重复一次。每孔上样100 μl已处理好的血清样品，室温振荡1 h。弃掉液体，用200 μl结合缓冲液(100 mmol/L NaOAc pH4.0)洗2次，每次5 min，拆下芯片，待芯片自然干燥，然后每点加SPA 0.5 μl ， 两次。干燥，用CM10蛋白芯片阅读仪读芯片。 SPA=Sinapinic acid为CAN(乙腈)50 %和TFA(三氟乙酸)0.5 %的饱和溶液。(3)数据收集：设定检样激光强度195，检测灵敏度8，收集数据质荷比(M/Z)范围1.0～2.0 KD。收集位置20～80。平均每点收集20次，收集总点数是140次。在每次实验数据收集前，用All-in-one蛋白芯片校正仪器，使之误差<0.1 %。以质量控制蛋白质芯片做重复性检测，其峰值的大小及其强度的变异系数(CVS)均控制在0.05 %和15 %以下，具有良好的重复性。
危重病人预警蛋白(LGT)检测：即SELDI检测方法(全称是[SELDI-TOF-MS]，即表面增强激光解析离子飞行时间(time of flight)质谱技术)。出现在质核比(M/Z)11 000+H至12 000+H之间的蛋白质指纹即为LGT指纹，以出现单峰或以上质谱峰簇(cluster)且丰度值≥5%为LGT阳性[2]。
1.3 统计学处理 观察无疾病进展生存期的中位生存期。所有数据均采用SPSS 16.0统计软件进行处理。统计学方法选择Kaplan-Meier法。P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 影响术后结直肠癌患者无疾病进展生存时间的单因素分析见表1。
表1 影响术后结直肠癌患者无疾病进展生存时间的单因素分析
从表中可以看出，LGT阳性患者无疾病进展生存时间仅为2.80个月，而LGT阴性患者的无疾病进展生存时间为10.00个月，其无疾病进展生存时间曲线如图1。
图1 不同LGT表达无疾病进展生存时间曲线图
结肠癌与直肠癌患者的中位无疾病进展生存时间分别为7.2个月和6个月；男性和女性结直肠癌患者的中位无疾病进展生存时间分别为8.50个月和4.95个月；<65岁与≥65岁结直肠癌患者的中位无疾病进展生存时间分别为7.85个月和6.50个月，以上各组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。
手术前LGT为阳性者中位无疾病进展生存时间为2.8个月，阴性者为10个月( 字2=14.205，P<0.01)，说明LGT阳性与阴性术后结直肠癌患者无疾病进展生存时间不同 ......
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