pl6及Ki—67蛋白在宫颈上皮内瘤变中的临床检测意义(1)
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【摘要】 目的：探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)中pl6及Ki-67蛋白的临床表达及意义。方法：收集本院经活检或手术切除的子宫颈组织标本97例，其中宫颈正常或非特异性炎性病变17例；CINⅠ～Ⅲ 55例，宫颈鳞状细胞癌25例。对全部组织标本的pl6及Ki-67蛋白阳性表达情况进行检测。结果：CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌之间的pl6及Ki-67阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。而CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌患者的阳性表达率显著高于宫颈正常或非特异性炎性病变患者(P<0.05)，且pl6及Ki-67阳性表达情况呈逐渐上升趋势。结论：p16蛋白能有效的对宫颈良性病变、CIN及宫颈癌进行鉴别诊断，并能够通过p16的染色情况对CINⅠ和CINⅡ～Ⅲ进行鉴别，能够有效对CIN的分级情况进行判断。宫颈高度病变可以根据Ki-67蛋白的阳性表达情况与宫颈癌进行鉴别，但在与宫颈低度病变的鉴别中，还需要联合p16蛋白的阳性表达情况进行区分。
【关键词】 宫颈上皮内瘤变； pl6蛋白； Ki-67蛋白； 检测意义
pl6能够直接影响细胞周期，并对细胞分裂进行抑制，又称为肿瘤抑制基因，在多种肿瘤组织中出现突变、缺失或甲基化，目前已在宫颈腺状及鳞状病变的检测中应用较为广泛[1]。而Ki-67作为一种细胞增生标记物，能够对肿瘤的增殖活性进行预测[2]。而宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)属于一种癌前病变，与宫颈癌的发生密切相关，其上皮细胞在形态学上存在排列紊乱，形态不规则，核大深染且分裂相较多见[3]。本文对pl6及Ki-67蛋白在宫颈上皮内瘤变中的临床表达情况进行检测，探讨其在宫颈病变中的意义，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择本院2009年8月-2011年8月经活检或手术切除的子宫颈组织标本97例，年龄32～72岁，平均(43.7±6.9)岁，17例患者为宫颈正常或非特异性炎性病变；55例患者CINⅠ～Ⅲ，其中，CINⅠ 22例，CINⅡ 17例，CINⅢ 16例；25例患者为宫颈鳞状细胞癌。
1.2 检测方法 全部标本均予以10%福尔马林进行固定，采用石蜡包埋， 4μm厚度连续切片，予以常规HE染色，并在光镜下观察细胞形态后进行病理诊断及分组。采用SP法进行免疫组织化学染色，具体操作过程严格遵守说明书进行。pl6及Ki-67均予以pH6.0柠檬酸缓冲液高压修复，两种抗体都设立阴性和阳性对照片，所有试剂盒、pl6及Ki-67均由上海赛亚生物技术有限公司提供。
1.3 结果评判 在光镜下对每张切片随机观察5个视野，每个视野均计数200个细胞，将观察平均值记录为每张切片的最终结果，pl6阳性结果为细胞浆或细胞核内出现棕黄色颗粒，根据阳性细胞的分布及所占比例情况可评判为：(1)单个细胞染色，阳性细胞数在低于5%为阴性(-)；(2)存在小的细胞团染色，阳性细胞范围为5%～24%为弱阳性(+)；(3)存在片状细胞染色，阳性细胞范围为25%～50%为阳性(++)；(4)细胞染色广泛存在，阳性细胞数高于50%为强阳性(+++)。Ki-67阳性结果定位细胞，核染为棕黄色，根据阳性细胞所占比例情况为评判为：(1)未观察到阳性细胞为阴性(-)；(2)阳性细胞数量在10%以下为弱阳性(+)；(3)阳性细胞数量在10%～30%为阳性(++)；(4)阳性细胞数量在30%超过30%为强阳性(+++)[4]。
1.4 统计学处理 全部数据均采用SPSS 17.0统计学软件进行分析，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌之间的pl6及Ki-67阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。而CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌患者的阳性表达率显著高于宫颈正常或非特异性炎性病变患者(P<0.05)，且pl6及Ki-67阳性表达情况呈逐渐上升趋势，见表1。
3 讨论
p16基因属于CDKN2A基因家族，定位于人类染色体9p21，编码为p16蛋白，作为一种负性调节因子参与细胞周期的调控。通过与细胞周期蛋白D竞争结合CDK4，同时对CDK4/CDK6的活性进行抑制，阻止细胞从G期至S期，从而对有丝分裂进行负性调节。Martin等[5]报道称，p16的过度表达和病毒早期蛋白(病毒致癌基因)编码区的活性密切相关。p16能够对肿瘤细胞的增殖产生抑制作用，若存在缺失情况，则可使细胞恶化的几率上升。本研究中，p16蛋白在宫颈正常或非特异性炎性病变患者的绝大多数表现为阴性，在CINⅠ中阳性率为77.3%，而在CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌的阳性率为100%，且随着宫颈病变程度的加剧，其阳性表达情况也呈上升趋势，从而显示p16的高阳性表达情况与子宫颈上皮恶化的程度密切相关。
Ki-67在增殖期细胞的核抗原中表达，参与细胞周期的调控，除了G1、S、G2期以外，在细胞活动周期均可进行表达，与肿瘤淋巴结或脏器转移、病理组织分级及临床分期密切相关，已广泛的应用于肿瘤细胞增殖活性的研究 ......
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