1.3 T-SPOT.TB仪器、试剂、检测方法及结果判断 采用海尔Biosafety Cabinet生物安全柜，REVCO CO2孵育箱。T-SPOT.TB试剂盒由上海长征复星公司提供。具体检测方法：按照试剂盒说明书采集外周静脉血4 mL，肝素抗凝，分离外周血单个核细胞(PBMCs)，用细胞培养基AIMV 重悬细胞，并将浓度调整至2.5×106/mL。在已包被抗IFNγ单抗的96孔板上，分别加入50 μL细胞培养基作为空白对照，50 μL植物血凝素作为阳性对照，以50 μL结核分枝杆菌特异性ESAT-6和CFP-10作为刺激原。然后在每个孔中加入100 μL上述细胞悬液。把96孔板放在37 ℃孵箱培养16～20 h后， 用PBS液洗板4次，加入碱性磷酸酶标记的二抗，在2～8 ℃下孵育1 h。孵育后再用PBS液洗板4次。最后每孔加入显色底物BCIP/NBTPLUS， 室温中静置7 min后蒸馏水终止反应。阳性结果判断标准：(1)如果空白对照孔斑点数<5个，检测孔斑点数减去空白对照孔斑点数≥6；(2)如果空白对照孔斑点数≥6个 ......