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编号:12604146
复发性流产与宫颈HPV感染的相关性分析(2)
http://www.100md.com 2015年5月25日 中国医学创新 2015年第15期
     1.2 实验室取材 观察组在确认胚胎停止发育,对照组于人工流产时进行取样,取样时采用棉拭子轻轻拭净宫颈口过多的分泌物,再用宫颈刷,在宫颈管内鳞柱上皮交界处采样,采样时稍用力转动数周,取得宫颈脱落细胞,放入有专用细胞保存液的试管中采集标本密闭,并在2 h内保存于4 ℃冰箱中,在48 h内进行下一步检查。

    1.3 基因检测 采用导流杂交基因芯片技术,进行23种(18种高危型和5种低危型)HPV基因型的检测。主要步骤:(1)样本处理及HPV-DNA提取和富集:将选取的细胞样本加入预先配置的细胞消化液释放细胞DNA。(2)HPV-PCR扩增:选择HPVl基因区共有引物GP5+/GP6+和β-globin基因引物Glob-F/Glob-R对所有标本进行PCR 检测,后选用改进MY09/11共有引物(PGMY09/11)对所有β-Globin阳性而HPV阴性的标本进行二次扩增,检测HPV-611,16,18,30,31,33,35,45,51和52,采用目的基因的量/内参基因的量消除样本间的扩增效率差异,每管样本重复测量3次。PCR扩增程序设定,温度变化设定:95 ℃ 10 s, 95 ℃ 5 s,60 ℃ 20 s,75 ℃ 10 s,共进行40个循环,温度变化速率20 ℃/s ......
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