1.3 试验步骤 所有标本离体常规固定、脱水及石蜡包埋行厚4 μm连续切片，用Envision二步法免疫组化染色，p-mTOR、p-p70S6K一抗的工作浓度为1∶100，常規二甲苯脱蜡、梯度酒精水化、柠檬酸盐缓冲液高温高压抗原修复，一抗和二抗分别孵育、二氨基联苯胺显色、苏木素复染，中性树脂封片观察。用已知阳性的切片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲溶液代替一抗作为阴性对照。

    1.4 结果判定标准 p-mTOR蛋白主要定位于细胞质，部分位于细胞膜，阳性者细胞质可见黄色颗粒，p-p70S6K蛋白定位在细胞核，阳性染色为棕黄色或棕褐色颗粒样物质。每个标本至少计数100个细胞，基于染色强度和p-mTOR阳性肿瘤细胞百分比进行评分。染色强度：0分(无染色)、1分(弱染色)和2分(强染色)，用染色强度乘以阳性细胞所占的比例，≤20为阴性，>20为阳性[8]。以上结果均至少由两位病理科医生以双盲法观察确定。

    1.5 统计学处理 使用统计分析软件SPSS 21.0进行数据处理。计数资料以率表示，多组比较采用 字2检验，多组间两两比较的显著性水平经Bonferroni校正 ......