【摘要】 目的：前期研究发现小鼠细胞因子LIGHT(TNFSF14)能够抑制脂肪前体细胞分化，表达纯化LIGHT并验证其活性，将为进一步明确其调控脂肪前体细胞分化的机制提供坚实的基础。方法：以小鼠脾脏总cDNA为模板，通过PCR扩增得到LIGHT胞外段编码序列，并将其克隆至pGEX4T-1，经菌液PCR、限制性内切酶酶切及测序验证后获得重组质粒pGEX4T-1-LIGHTc。重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经IPTG诱导蛋白表达后SDS-PAGE检测菌体破碎液上清中可溶型LIGHTc的存在。含有重组蛋白的上清经亲和纯化后获得GST-LIGHTc重组蛋白，重组蛋白经凝血酶消化后得到游离型LIGHTc单体，最后通过结肠癌细胞生长抑制实验验证LIGHTc单体的活性。结果：通过大肠杆菌异源表达和亲和纯化获得了GST-LIGHTc重组蛋白 ......