1.3 切片与分组 本实验依二次固定时间的不同分为A、B、C、D、E、F、G组，分别进行染色，其中A组不进行二次固定，B～G组均采用Bouin氏液进行二次固定，固定温度37 ℃，固定时间：B组15 min、C组30 min、D组1 h、E组2 h、F组4 h、G组过夜。每例蠟块连续切7张3.5 μm厚白片且均按照A～F顺序编号(共计35张)，60 ℃烤片1 h备用。

    1.4 方法与步骤 (1)脱蜡：二甲苯60 ℃ 0.5 h两次，无水酒精10 min两次，95%酒精10 min两次，75%酒精10 min两次后至水;(2)二次固定(具体见“分组”，A组跳过此步)，流水冲洗至黄色褪尽(约10 min);(3)媒染：Weigert铁苏木素A、B混合液滴染10 min，自来水稍洗;(4)分化返蓝：1%盐酸酒精数秒，自来水冲洗10 min，蒸馏水稍洗;(5)丽春红酸性品红溶液滴染10 min，蒸馏水洗稍洗;(6)磷钼酸溶液滴染3 min，倾去;(7)苯胺蓝溶液滴染3 min，倾去;(8)1%冰醋酸溶液涮洗至无蓝色脱出;(9)脱水、透明：95%酒精稍洗两次，无水酒精10 min两次，二甲苯10 min两次;(10)中性树胶封固 ......