HPV18阳性和HPV18阴性子宫颈癌组织中miR-24-3p和HOXB8蛋白的表达差异及其机制研究(3)
1.2.2 免疫印迹法检测两组HOXB8蛋白的表达水平 称取100 mg子宫颈癌组织，冰上匀浆，离心去除上清，收集沉淀。按照总蛋白提取试剂盒说明书提取子宫颈癌组织的总蛋白，并采用BCA法进行蛋白定量。加入4×SDS Loading Buffer后煮沸使蛋白变性。取10 μL蛋白样品，进行SDS-PAGE凝胶电泳，80 V电泳浓缩胶，120 V电泳分离胶。冰上恒流0.3 A(或恒压60 V)转膜2 h，PBST洗一次后采用2%BSA室温封闭1 h。分别与HOXB8抗体和GAPDH抗体于4 ℃孵育过夜。PBST洗
3次，5 min/次，二抗室温孵育1 h。PBST洗3次，5 min/次，ECL发光液孵育1 min后在凝胶成像分析仪上显影成像，以GAPDH蛋白为内参计算HOXB8蛋白的相对表达水平。
1.2.3 巢式降落式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)檢测两组miR-24-3p启动子区DNA甲基化水平 称
取50 mg子宫颈癌组织 ......
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