祝萍萍 范红星 梁瑞华 陈江瑛 谭燕萍

    【摘要】 目的：研究A型鉀通道亚型Kv1.1在癫痫大鼠海马神经元中的蛋白表达和电生理功能变化，初步探讨Kv1.1在癫痫发生中的作用和意义。方法：2019年1-12月选取24只成年雄性SD大鼠，根据随机数字表法分为对照组和模型组，每组12只。模型组通过向腹腔注射氯化锂-匹罗卡品制备癫痫模型，对照组采用0.9%氯化钠溶液代替处理。每组6只进行免疫印记和电生理检测。利用Western blot方法检测并比较两组海马区Kv1.1的蛋白表达。利用全细胞膜片钳技术记录并观察两组海马区锥体神经元细胞膜上总的外向钾离子电流和Kv1.1介导的钾电流变化。结果：模型组海马区Kv1.1的蛋白表达量低于对照组(P1 GΩ时，通过嘴吸或者放大器电击(ZAP)破膜形成全细胞记录。全细胞记录形成后，在电压钳模式下，钳制膜电位在-80 mV，给予细胞跃阶电压刺激，方案如下：给予-100～40 mV跃阶电压刺激，时长为500 ms，step=10 mV。向灌流液中加入1 μM TTX，100 μM CdCl2分别阻断钠电流、钙电流，就可以分离出总的外向钾离子电流。然后，再向灌流液中加入Kv1.1的特异性阻断剂DTX-κ(100 nM)阻断全细胞外向钾电流，并给予细胞上述跃阶电压刺激，将以上得到的两个电压钳图形使用CLAMPfit软件相减，就分离出Kv1.1介导的钾离子电流。

    1.3 观察指标 (1)比较两组Kv1.1蛋白相对表达量。(2)海马区总的外向钾离子电流变化 ......