刘 通，杨 丽，陈 赢，唐 静，林 源，马国荣，杨延辉

    (宁夏医科大学基础医学院，银川 750004)

    结核病(tuberculosis，TB)是一种慢性传染性疾病，亦是全球十大死亡原因之一。它的病原体是结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)。2019年世界卫生组织发布的TB报告显示，全球约25%的人口曾感染过MTB，每年约有1000万人患TB，约145万人死亡[1]。如果诊断及时，用一线抗结核药物经过6个月的治疗，大多数肺结核患者可以治愈，但耐药TB仍然是严重的公共卫生问题。2017年新发TB患者对利福平(rifampin，RIF)耐药人数达55.8万，其中82%发展为耐多药结核病(MDR-TB)[2-4]。传统认为RIF的耐药基因主要为rpoB、rpoC、rpoA及rpoZ，但耐药形成的分子机制报道较少[5-9]。本文用Illumina HiseqTM3000高通量测序平台对1/2最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)的RIF处理前后MS MC2155的总RNA进行测序，通过比对筛选获得差异表达基因(difference expressed gene，DEG)，并对DEG的功能进行聚类富集分析发现，使用RIF后能调控分枝杆菌万古霉素耐药、氧化磷酸化和共生体调节的关键基因，为进一步探讨RIF耐药机制的形成过程及寻找潜在的新型抗耐药MTB的靶标奠定了基础。

    1 材料与方法

    1.1 菌株、培养基及主要试剂

    MS MC2155由中国医学科学院医药生物技术研究所肖春玲研究员惠赠。7H9、7H10培养基、OADC(美国BD公司)；RIF、刃天青(北京博奥拓达科技有限公司)。

    1.2 主要仪器

    37℃培养箱(上海琅玕实验设备有限公司，HF240)；酶标仪(Thermo Scientific-Multiskan GO)；紫外分光光度计(上海光明电子仪器厂，721型)；台式高速冷冻离心(德国Eppendorf公司，5424 R)；生物安全柜(Heal Forec力康生物技术有限公司，900B2)；高压灭菌锅(Tomy Digital Biology公司，SX-500)；核酸电泳仪和紫外切胶仪(北京六一仪器厂，WD-9403F)；恒温摇床(上海旻泉仪器有限公司，LPL-24)；核酸凝胶成像仪(美国Bio-Rad公司，Gel DocTMXR+)。

    1.3 刃天青法测定RIF对MS MC2155的MIC ......