方丹丹， 杨 华， 李 元， 路玉祥， 李西艳， 杨 丽， 楚元奎

    (1.宁夏医科大学临床医学院，银川 750004； 2.宁夏医科大学实验动物中心，银川 750004)

    前列腺癌(prostate cancer，PCa)是全世界男性患者最常见的恶性肿瘤，在男性肿瘤患者中的发病率和病死率中分别位于第2 位和第4 位[1]。2015 年我国PCa 新发病例数约为60300 例，死亡人数约为26600 例，新发病例数和死亡人数均排在男性泌尿系统肿瘤的第2 位[2]。尽管早期PCa 经过局部手术可达到较好的治疗效果，但部分患者随着病情进展需采用雄激素剥夺疗法。经过18～24 个月雄激素剥夺法治疗后，PCa 最终发展为雄激素非依赖性PCa，这类患者治疗及预后均较差，临床上尚无有效的治疗方法[3]。因此，进一步揭示PCa 发生、发展的分子机制，将有助于提高其临床诊断和治疗水平。

    微小 RNA(microRNAs，miRNAs)是一类高保守内源性单链小分子非编码RNA，长度约为18～25 个核苷酸，可通过与靶基因序列互补结合，从转录后水平抑制靶基因的表达，是基因调控网络中的核心成分。多种miRNAs 参与了PCa 的发生、发展，在PCa 细胞的增殖和转移过程中发挥着重要的作用[4-8]。已有研究[9-11]表明，miR-3064-5p 在肝癌和胃癌细胞生长调控中发挥抑癌作用。目前miR-3064-5p 在PCa 细胞增殖与转移中的作用仍不明确。本研究旨在进一步阐明miR-3064-5p 在PCa 细胞增殖与转移中的作用并探讨其分子机制，以期为PCa 的诊断和治疗寻找新的靶点。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    人PCa 细胞株PC3、DU145、正常前列腺上皮细胞RWPE-1 及K-SFM 培养液购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库(中国上海)。胎牛血清和RPMI-1640 培养基购自GIBCO 公司；mimic nc 及 miR-3064-5p mimic、靶向真核翻译起始因子5(EIF5)双荧光素酶报告载体由广州锐博生物科技有限公司合成；转染试剂Lipofectamine 2000 购自美国 Invitrogen 公司；Trizol试剂购自天根生化科技(北京)有限公司；HiS-cript II Q RT SuperMix for qPCR 和ChamQ SYBR qPCR Master Mix 购自诺唯赞公司；兔抗人EIF5抗体、鼠抗人GAPDH 抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔、羊抗鼠二抗购自美国ProteinTech-Group 公司；总蛋白提取试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；Dual-GloRLuciferase Assay System试剂盒购自美国Promega 公司；miR-3064-5p 序列来源于NCBI 网站 ......