表告依春调控NF-kB 相关炎症通路对骨肉瘤细胞恶性行为的抑制
小室,成骨细胞,抗炎,1材料与方法,1实验材料,2细胞培养及分组,3Westernblot检测各组细胞蛋白表达水平,4CCK-8实验检测各组细胞增殖能力,5Transwell实验检测各组细胞侵袭及
赵 伟, 孟桢桢, 王 兴(三峡大学第三临床医学院,国药葛洲坝中心医院骨外科,宜昌 443003)
骨肉瘤是骨组织最常见的恶性肿瘤,好发于青少年或儿童,往往早期发生远处转移,预后不佳[1]。手术联合术后化疗是主要的治疗方案,但绝大多数患者仍由于肿瘤细胞耐药及不良反应无法耐受导致治疗失败,寻找更安全的化合物作为联合治疗的辅助用药将有助于改善这一困境。表告依春(epigoitrin,EPG)作为板蓝根(radix isatidis,RI)提取物,被证实在体内外发挥着抗病毒、抗炎及抗氧化应激等作用[2-3],由于炎症与肿瘤的发生、发展存在密切联系[4-6],EPG 也被发现参与恶性肿瘤的相关生物学过程[7]。本研究对EPG 在骨肉瘤细胞炎症因子表达及恶性行为方面的影响进行了探究,同时通过成骨细胞模型评价EPG的潜在细胞毒性。
1 材料与方法
1.1 实验材料
DMEM 培养基、胎牛血清(FBS)均购自美国Gbico 公司,Epigoitrin 购自美国Selleck 公司,细胞裂解液及蛋白酶抑制剂购自上海碧云天生物技术有限公司,核因子-kB(nuclear factor kappa-B,NF-kB)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNFα)抗体均购自美国proteintech 公司,CCK-8 试剂购自日本同仁化学研究所,Transwell 小室及Matrigel 基质胶购自美国Corning 公司,β-Actin、NFkB、IL-1β 及TNF-α 单克隆抗体均购自美国proteintech 公司。
1.2 细胞培养及分组
使用含10% FBS 的DMEM 培养基培养人成骨细胞HOB 及骨肉瘤细胞U2OS,培养条件:37 ℃、5% CO2 ......
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