联合阻断CD28/B7和ICOS对大鼠皮肤移植的影响
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【摘要】目的探讨CD28/B7和ICOS/ICOSL对同种异体大鼠皮肤移植的影响。方法Wistar大鼠随机分为四组，每组6只。A组：CTLA4Ig处理组，B组：ICOSIg处理组，C组：CTLA4Ig+ICOSIg处理组，D组：空白组。大鼠同种异体移植术后0、2、4 d，A、B、C组各抗体以150 mg/kg的剂量经腹腔注射，D组只注射同等量的生理盐水，术后观察皮肤存活情况。术后6 d处死各组受体鼠和供体鼠，取受体脾脏淋巴细胞与供体脾脏淋巴细胞作混合淋巴细胞反应(MLR)。术后7 d移植物作组织学分析。结果MLR显示与对照组相比，各阻断剂治疗组淋巴细胞对供体淋巴细胞产生特异性低反应(P<0.05)，能有效抑制免疫应答。组织学检查发现，各抗体治疗组移植皮肤结构基本正常。结论CTLA4Ig、ICOSIg可以抑制免疫应答，诱导免疫耐受。
【关键词】皮肤移植；混合淋巴细胞反应；CTLA4；ICOS
1资料与方法
1.1主要试剂CTLA4Ig(博奥森生物试剂有限公司),ICOSIg(Santa),RPMI1640(GIBCO),胎牛血清(四季青公司),MTT(Solarbio),淋巴细胞分离液(Solarbio),丝裂霉素(浙海海正药业),台盼蓝(Solarbio)。
1.2实验动物Wistar大鼠，清洁级，雌性未孕，7～8周，180～200 g，营养良好。
1.3实验方法大鼠24只，随机分为四组。受体背部脱毛，麻醉，固定、消毒，在脊柱旁开0.5 cm、肋下0.5 cm处做1个直径1.5 cm创面，深达肌筋膜。供体同样处理，取直径1.5 cm皮肤，移植到受体创面，8针打包缝合，术后观察。
1.4实验分组A组：CTLA4Ig治疗组；B组：ICOSIg治疗组；C组：CTLA4Ig+ICOSIg治疗组，移植后0.2 d、4 d各抗体以150 mg/kg的剂量经腹腔注射；D组：空白对照组，注射同等量生理盐水。混合淋巴细胞反应术后6 d处死受体供体各2只。
1.4.1无菌取脾脏受体脱颈致死，75%酒精浸泡5 min，取脾脏PBS浸泡，研磨过120目滤网。离心洗涤，Ficoll分离，收集淋巴细胞作为反应细胞 ......
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