高效液相色谱法测定珍合灵片中甘草酸的含量
【摘要】目的采用高效液相色谱法(HPLC)测定珍合灵片中甘草酸的含量。方法高效液相色谱法(HPLC法)，色谱柱phenomenex(5 μm，4.60×250 mm)；以乙腈-(0.025 mol/l)磷酸氢二钠(20:80的试液为流动相)；流速1.0 ml/min；柱温为30 ℃；灵敏度0.05 AUF；检测波长254 nm。结果甘草酸在1.890~18.90 μg/ml范围内呈良好的线性关系，r=0.9998(n=6)平均回收率在98.57%。结论该方法分离度好，重现性好，回收率高，简便，准确，可以用于珍合灵片的质量控制。
【关键词】高效液相色谱；珍合灵片；甘草酸
珍合灵片是临床上常用于精神病的辅助治疗和治疗失眠的中成药制剂，其功能是养血安神。《中国药典》(2010年版一部)中对该制剂还没有记载。只有生产厂家参照国家食品药品管理局的标准YBZ05802005对其有形状和鉴别试验，对甘草酸含量测定还未收载有质量控制方法，影响了生产单位对该产品质量上的定量控制。近年来，有关复方制剂甘草酸含量测定方法报道的很多[1～3]。为探讨其质量控制方法，笔者采用高效液相色谱法(HPLC)测定其中甘草酸的含量，结果较为满意。
, 百拇医药
1仪器与材料
岛津LC-10ATUP高效液相色谱仪梅特勒AG135型电子天平；超声波清洗机3200D 180W 40KHz。甘草酸对照品(中国药品生物制品检定所110731-200615)；蒸馏水为超纯水；流动相乙腈为色谱纯，甲醇和浓氨溶液均为色谱纯，磷酸氢二钠分析纯；珍合灵片(株洲市三医院，批号：20101201，江西杏林白马药业有限公司生产)。
2实验方法
2.1色谱条件与系统选择性试验以十八烷基硅胶为填充剂，以乙腈-(0.025 mol/l)磷酸氢二钠(20∶80的试液为流动相)；流速1.0 ml/min；柱温为30 ℃；灵敏度0.05 AUF；检测波长254 nm；理论板数按甘草酸计算应不低于2000[4]。色谱柱phenomenex(5 μm，4.60×250 mm)；SPD-M10AUP紫外检测器；Lcsolustion色谱工作站。
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2.2标准曲线的制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取甘草酸对照品2 mg，用0.5%的浓氨溶液-甲醇(1∶1)溶解并配成浓度为0.01930 mg/ml的溶液100 ml(每1 ml含甘草酸单铵盐对照品0.01930 mg,折合甘草酸为0.01890 mg/ml)。
2.2.2供试品溶液的制备取珍合灵片20片去薄膜衣，称定重量，研细，取约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入0.5%的浓氨溶液-甲醇(1∶1)100 ml,称定重量，超声处理(功率180 W，频率40 KHz)30 min，放冷，再称定重量，用0.5%的浓氨溶液-甲醇(1∶1)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3标准曲线的制备精密量取对照品溶液适量分别吸取为1.0、2.0、4.0、6.0, 8.0、10.0 ml标准溶液于10 ml容量瓶中，加入浓氨-甲醇标准溶液至刻度，各进样50 μl测定峰面积(A)，并以对照品的浓度(C)对峰面积(A)进行回归分析，得回归方程为A=35 426.51C-2101.33(r=0.999 8)。结果表明甘草酸浓度在1.89～18.90 μg/ml范围内线性良好。
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2.3回收率实验采用加样回收法，分别精密吸取样品1 ml，置50 ml量瓶中，加0.5%的浓氨溶液-甲醇(1∶1)至刻度，再精密吸取6份稀释液1 ml至10 ml量瓶中，定量加入不同浓度的甘草酸对照品2.0 ml，加浓氨-甲醇溶液至刻度，依法测定，回收率分别为98.60%、97.98%、98.60%、98.75%、98.87%；98.82%，平均回收率为(98.57±0.28)%(n=6)。
2.4稳定性实验配制同一供试品溶液，精密吸取样品溶液1.0 ml，置50 ml量瓶中，加浓氨-甲醇溶液至刻度，摇匀，过滤，分别在0、2、4、6、8、10、12、24、36、48 h自动每次进样50 μl，求得甘草酸的RSD为0.64%，表明样品溶液在48 h内稳定。
2.5重现性实验取已知含量的同一对照品溶液5份，分别进样，按上述方法测定甘草酸的含量，测得甘草酸的RSD值分别为1.28%。表明本实验所确定的HPLC法进行甘草酸的含量分析，重现性好，准确度较高。
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2.6样品测定精密吸取样品溶液1.0 ml，置50 ml量瓶中，加浓氨-甲醇溶液至刻度，摇匀，过滤，进样50 μl，依法测定，结果珍合灵片的甘草酸含量分别为(14.037 6 mg/片，14.052 7 mg/片，14.022 6 mg/片(平均含量为14.037 6±0.012 3 mg/片))。
3讨论
3.1珍合灵片是一种多组分的复方制剂，实验表明在本实验条件下其他成分对甘草酸的测定无干扰。
3.2按本法对甘草酸进行高效液相色谱分析，具有回收率和线性相关系数良好，操作简便，快速，样品用量少，稳定性和重现性好，自动化程度高等优点，适用于甘草酸的质量控制，具有广泛的应用前景。
参考文献
[1]王兰霞,杨玲露.RP-HPLC测定五味沙棘口服液中甘草酸的含量.中国药学杂志,1997,32(7):434.
[2]韦向红.HPLC法测定复方桔梗止咳片中的甘草酸的含量.广西中医学院学报，2006,9(2):67-69.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部).北京:中国医药科技出版社,2010:866-867.
[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部).北京:中国医药科技出版社,附录36-38.
【收稿日期】2011-05-07
(本文编辑：刘曾敏), 百拇医药(贾盛华)
【关键词】高效液相色谱；珍合灵片；甘草酸
珍合灵片是临床上常用于精神病的辅助治疗和治疗失眠的中成药制剂，其功能是养血安神。《中国药典》(2010年版一部)中对该制剂还没有记载。只有生产厂家参照国家食品药品管理局的标准YBZ05802005对其有形状和鉴别试验，对甘草酸含量测定还未收载有质量控制方法，影响了生产单位对该产品质量上的定量控制。近年来，有关复方制剂甘草酸含量测定方法报道的很多[1～3]。为探讨其质量控制方法，笔者采用高效液相色谱法(HPLC)测定其中甘草酸的含量，结果较为满意。
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1仪器与材料
岛津LC-10ATUP高效液相色谱仪梅特勒AG135型电子天平；超声波清洗机3200D 180W 40KHz。甘草酸对照品(中国药品生物制品检定所110731-200615)；蒸馏水为超纯水；流动相乙腈为色谱纯，甲醇和浓氨溶液均为色谱纯，磷酸氢二钠分析纯；珍合灵片(株洲市三医院，批号：20101201，江西杏林白马药业有限公司生产)。
2实验方法
2.1色谱条件与系统选择性试验以十八烷基硅胶为填充剂，以乙腈-(0.025 mol/l)磷酸氢二钠(20∶80的试液为流动相)；流速1.0 ml/min；柱温为30 ℃；灵敏度0.05 AUF；检测波长254 nm；理论板数按甘草酸计算应不低于2000[4]。色谱柱phenomenex(5 μm，4.60×250 mm)；SPD-M10AUP紫外检测器；Lcsolustion色谱工作站。
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2.2标准曲线的制备
2.2.1对照品溶液的制备精密称取甘草酸对照品2 mg，用0.5%的浓氨溶液-甲醇(1∶1)溶解并配成浓度为0.01930 mg/ml的溶液100 ml(每1 ml含甘草酸单铵盐对照品0.01930 mg,折合甘草酸为0.01890 mg/ml)。
2.2.2供试品溶液的制备取珍合灵片20片去薄膜衣，称定重量，研细，取约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入0.5%的浓氨溶液-甲醇(1∶1)100 ml,称定重量，超声处理(功率180 W，频率40 KHz)30 min，放冷，再称定重量，用0.5%的浓氨溶液-甲醇(1∶1)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3标准曲线的制备精密量取对照品溶液适量分别吸取为1.0、2.0、4.0、6.0, 8.0、10.0 ml标准溶液于10 ml容量瓶中，加入浓氨-甲醇标准溶液至刻度，各进样50 μl测定峰面积(A)，并以对照品的浓度(C)对峰面积(A)进行回归分析，得回归方程为A=35 426.51C-2101.33(r=0.999 8)。结果表明甘草酸浓度在1.89～18.90 μg/ml范围内线性良好。
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2.3回收率实验采用加样回收法，分别精密吸取样品1 ml，置50 ml量瓶中，加0.5%的浓氨溶液-甲醇(1∶1)至刻度，再精密吸取6份稀释液1 ml至10 ml量瓶中，定量加入不同浓度的甘草酸对照品2.0 ml，加浓氨-甲醇溶液至刻度，依法测定，回收率分别为98.60%、97.98%、98.60%、98.75%、98.87%；98.82%，平均回收率为(98.57±0.28)%(n=6)。
2.4稳定性实验配制同一供试品溶液，精密吸取样品溶液1.0 ml，置50 ml量瓶中，加浓氨-甲醇溶液至刻度，摇匀，过滤，分别在0、2、4、6、8、10、12、24、36、48 h自动每次进样50 μl，求得甘草酸的RSD为0.64%，表明样品溶液在48 h内稳定。
2.5重现性实验取已知含量的同一对照品溶液5份，分别进样，按上述方法测定甘草酸的含量，测得甘草酸的RSD值分别为1.28%。表明本实验所确定的HPLC法进行甘草酸的含量分析，重现性好，准确度较高。
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2.6样品测定精密吸取样品溶液1.0 ml，置50 ml量瓶中，加浓氨-甲醇溶液至刻度，摇匀，过滤，进样50 μl，依法测定，结果珍合灵片的甘草酸含量分别为(14.037 6 mg/片，14.052 7 mg/片，14.022 6 mg/片(平均含量为14.037 6±0.012 3 mg/片))。
3讨论
3.1珍合灵片是一种多组分的复方制剂，实验表明在本实验条件下其他成分对甘草酸的测定无干扰。
3.2按本法对甘草酸进行高效液相色谱分析，具有回收率和线性相关系数良好，操作简便，快速，样品用量少，稳定性和重现性好，自动化程度高等优点，适用于甘草酸的质量控制，具有广泛的应用前景。
参考文献
[1]王兰霞,杨玲露.RP-HPLC测定五味沙棘口服液中甘草酸的含量.中国药学杂志,1997,32(7):434.
[2]韦向红.HPLC法测定复方桔梗止咳片中的甘草酸的含量.广西中医学院学报，2006,9(2):67-69.
[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部).北京:中国医药科技出版社,2010:866-867.
[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部).北京:中国医药科技出版社,附录36-38.
【收稿日期】2011-05-07
(本文编辑：刘曾敏), 百拇医药(贾盛华)
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