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编号:13758848
液基细胞学与人乳头瘤状病毒联合检测分析对宫颈癌筛查的临床价值(1)
http://www.100md.com 2011年12月15日 黄川英
液基细胞学与人乳头瘤状病毒联合检测分析对宫颈癌筛查的临床价值,宫颈肿瘤,人乳头状瘤病毒(HPV-DNA)检测,薄层液基细胞学
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    参见附件。

     【摘要】目的探讨液基细胞学检查(LCT)、人乳头瘤状病毒(HPV-DNA)检测及两种联合检测对宫颈癌筛查的临床诊断价值。方法用人乳头瘤状病毒(HPV-DNA)检测和液基细胞学测试(LCT)对1565例患者进行了宫颈筛查,最后结合阴道镜活检组织病理结果作为诊断结果。结果在对高级别宫颈上皮内瘤变(CIN)的检测中,HPV-DNA与LCT的敏感性分别为94.26%、90.98%,特异性分别为81.39%、81.11%,而联合两种检测方法几乎可以筛查出所有的CINⅡ以上的病变,敏感性高达99%,明显提高了宫颈病变的检出率。结论HPV-DNA和LCT检测常用于宫颈癌筛查,联合应用能显著提高筛查效率。

    【关键词】宫颈肿瘤;人乳头状瘤病毒(HPV-DNA)检测;薄层液基细胞学;筛查

    The clinical value of liquid-cytology test(LCT) and human papilloma virus(HPV-DNA) for cervical cancer screening HUANG Chuan-ying.The Peoples Hospital of Guigang City, Guigang 537100,China

    【Abstract】ObjectiveTo dicuss the clinical value of liquid-based cytology test(LCT),human papilloma virus(HPV-DNA) and their combined analysis for cervical cancer screening.MethodsUsing two ways of HPV-DNA and LCT to check 1565 womens cervixs,which combined the results of colposcopy biopsy as the final diagnosis in screening cervical cancer.ResultsIn the high-grade examination of cervical intraepithelial neoplasia(CIN),the sensitivity of HPV-DNA and LCT were 94.26%, 90.98%,their specificity were 81.39%,81.11%,and combine two methods,which almost can screening above all of CINⅡpathological changes,their sensitivity can high to 99%.It improved the detection rate of cervical pathological change obviously.ConclusionBoth HPV-DNA test and LCT are valuable for screening cervical cancer.The combined detection by HPV-DNA test and LCT can significantly improve the detection rate in cervical cancer screening.

    【Key words】Cervix neoplasms;Human papilloma virus test(HPV-DNA);Liquid-bases cytology;Screening

    子宫颈癌是一种常见的妇科肿瘤,宫颈癌的癌前病变期是较长可逆的,宫颈癌早期诊断及治疗已被流行病学研究和临床研究重点关注。目前普遍认为人乳头瘤状病毒感染是引起宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的主要原因[1],所以常用人乳头瘤状病毒感染(HPV-DNA)检测的方法来筛查宫颈癌,同时以液基细胞学检查(LCT)方法进行辅助筛查。现讨论HPV-DNA检测和LCT及其组合在宫颈癌筛查中的临床价值,从而达到宫颈癌的早诊早治。

    1资料与方法

    1.1一般资料选择2010年7~12月在贵港人民医院妇产科住院及门诊进行宫颈癌筛查和诊治的1565名妇女,年龄16~68岁,72%年龄集中在20~45岁。1565例均同时进行宫颈脱落细胞的液基细胞学检查(liquid-based cytological test,LCT)和人乳头状瘤病毒(HPV-DNA)检测。标本采集前3 d内不使用阴道内药物或对阴道进行冲洗,24 h内无性行为,样本采集在非月经期进行。

    1.2取材使用凯普生物技术有限公司的一次性宫颈细胞采取器。首先,用扩阴器暴露宫颈口,再用棉拭子将宫颈口过多的分泌物拭去;然后将宫颈刷伸入宫颈口处,轻轻搓动宫颈刷使其顺时针转3~5圈;缓慢取出宫颈刷,将其放入装有细胞保存液的样本管中;在管口处将多余的刷柄折断,将刷头保留在样本管中,旋紧管盖,并在样本管上注明日期、姓名和编号等。

    1.3研究方法

    1.3.1HPV-DNA检测采用凯普公司HPV-DNA导流杂交检测技术[2],可以一次检测21个HPV的型别,其中5个低危型HPV(6、11、42、43、44)和16个高危型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、81)。

    1.3.1.1DNA提取(1)将临床标本震荡混匀,伸入采集管底部吸取临床标本500 ml置离心管,14 000 r/min离心5 min;(2)将上清液倒入废液缸,加入400 μl DNA提取溶液Ⅰ置离心管中,震荡混匀,100 ℃加热15 min;(3)点动离心后,加入400 μl DNA提取溶液Ⅱ,震荡混匀,静置2 min,14 000 r/min离心5 min;(4)将上清液倒入废液缸中,在14 000 r/min离心1 min,用200 μl的移液器将剩余上清液吸干净,开盖静置2 min;(5)加入60 μl DNA溶解液,震荡混匀,静置10 min,14 000r/min离心5 min;(6)吸取上清液1 μl加入凯普分装好的PCR反应试剂管中,点动离心,放入PCR仪中扩增。

    1.3.1.2DNA杂交(1)按自下而上的顺序放好金属板、分隔膜、杂交膜、硅胶圈、分隔室、压扣盖,将杂交仪温度设定为45 ℃,加入杂交液800 μl,进行预杂交2 min;(2)将杂交液排干,加入500 μl杂交液,将变性好的PCR扩增产物依次加入反应槽中,杂交10 min;(3)将温度调至25 ℃,并将杂交液排干,加入800 μl杂交液,排干,重复3次清洗杂交膜;(4)加入500 μl封阻液,预封阻,待温度降到30 ℃时排干,再加入500 μl封阻液,封阻5 min;(5)排干封阻液,加入酶标液500 μl,酶标3.5 min;(6)将温度调至36 ℃,并排干酶标液,加入800 μl洗涤液A,排干,重复4次清洗酶标液,加入500 μl显色液,显色3~5 min;(7)排干显色液,加入800 μl洗涤液B,排干,重复3次,加入蒸馏水清洗。

    

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