趋化因子CXCL14通过上调MMP-2表达促进人卵巢癌细胞的迁移(2)
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1.3 实验方法
1.3.1 细胞培养 SKOV-3细胞系购自美国典型培养物保藏中心，SKOV-3培养于含10%小牛血清的DMEM中。将细胞置于37 ℃、5% CO2和饱和湿度的培养箱中进行培养，每3～4天传代一次。
1.3.2 细胞增殖活性检测 取对数生长期细胞，接种于96孔培养板内，每孔200 μl。实验设阴性对照组和实验组，每组设6个复孔，待细胞贴壁后，向实验组加入0.57 ng/ml rhCXCL14，于0、24、48 h终止培养。培养终止前4 h每孔加入20 μl浓度为5 mg/ml的MTT，继续培养4 h，去上清后，每孔加入150 μl二甲亚砜，测吸光度值A492值[7]。
1.3.3 药物处理与划痕 取对数生长期细胞，接种于六孔板中，待细胞长满，用进口中号枪尖在六孔板里划痕，用双无DMEM培养基继续培养，同时向实验组加入rhCXCL14使其终浓度为0.57 ng/ml(用双无DMEM配制)。培养0、24、48 h后，分别在倒置显微镜下观察细胞的迁移情况。
1.3.4 半定量RT-PCR测定 SKOV-3细胞接种于六孔板中培养，分为对照组和实验组。对照组的三个孔用DMEM培养，而实验组用含0.57 ng/ml rhCXCL14的DMEM培养，于37 ℃、5% CO2孵箱培养48 h后，分别收集两组细胞。用TRIZOL法提取细胞总RNA，取总RNA 1 μg，采用MBI公司RT试剂盒，按说明书进行。将得到的mRNA进一步反转录成cDNA。取出cDNA进行半定量RT-PCR。94 ℃ 2 min→94 ℃ 30 s→56 ℃ 45 s→72 ℃ 50 s，后3步进行30个循环 ......
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