病毒性胃肠炎患者中诺如病毒感染情况的检测分析(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取2013年1-9月于笔者所在医院治疗的120例病毒性胃肠炎患者，其中男53例，女67例，年龄18～76岁，平均(45.17±1.35)岁。入选的对象包括：(1)每日排便次数为3次及3次以上，大便的性状发生改变，经大便常规检查WBC<15；(2)每日排便次数不到3次，但伴有大便性状发生改变及呕吐症状；(3)每日排便次数不到3次，伴有呕吐为主的症状。所有患者均伴有呕吐、腹泻等症状，同时需排除细菌感染及寄生虫感染。
1.2 方法
1.2.1 样本采集方法 样本采集盒为笔者所在医院统一发放，采集盒外层包裹可开启的塑料袋，所有采集样本均为患者发病3 d内的粪便样本，每份样本的样本量不得低于5 ml，样本采集后应立即低温送检，对不能进行检验的样本应在-20 ℃低温保存，禁止样本反复进行冻融。
1.2.2 样本处理方法 粪便样本室温下复融，将样本稀释液1 ml中加入0.1 g固态粪便样本或者0.1 ml液态粪便样本，使用涡旋仪混匀，室温条件下静置10 min，以5500 r/min转速离心5 min。
1.2.3 病毒RNA提取 运用病毒核酸提取试剂盒(美国QIAGEN公司提供)，按照试剂盒的操作说明进行操作。
1.2.4 逆转录聚合酶链反应 反应体系包括：2.5 μl缓冲液，2.5 μl BSA，10 U/μl AMV-RT，模板RNA 1.5 μl，2.5 mol/L MgCl2等。将PCR反应体系，离心，使用PCR仪扩增。在94 ℃变性反应3 min后，94 ℃反应1 min，58 ℃反应80 s，72 ℃反应1 min，反复进行30个循环后 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。