吴晶金，李玲玉，栗荣，殷世云

    云南省中医医院，云南昆明650021

    类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以侵蚀性关节炎为主要表现的全身性自身免疫病。我国大陆地区的RA患病率约为0.2%～0.4%。其主要结局是残疾，在类风湿关节炎自然病程中，5～10年的致残率为60%，病程30年的致残率为90%，寿命缩短10～15年，而伴关节外表现者的5年生存率仅为50%[1]，极大影响了患病人群的生活质量。开展干预RA研究对于人类健康具有重要意义。成纤维样滑膜细胞类似肿瘤样生长被认为是RA发生发展的重要机制，临床抗肿瘤药物如甲氨蝶呤、环磷酰胺等亦可用于类风湿关节炎的治疗。因此，从肿瘤发病学角度研究RA，有望发现全新的治疗靶标。基于嗜神经侵袭(perineural invasion，PNI)在肿瘤浸润转移中的关键作用，PNI相关神经营养因子及其受体在RA滑膜组织中亦有表达，该研究已为少数国外学者所重视，由此推测NI可能参与了RA的病理过程。本研究拟从Sema3A/NRP-1/PlexinA体系探讨其作用机制。

    1 材料

    1.1 动物SPF级DBA/1雄性小鼠90只，8周龄，体质量(21±5)g，购自北京维通利华实验动物有限公司，动物许可证号SCXK(京)：2016-0011，饲养于云南省中医医院中心实验室SPF级动物房，实验前适应性喂养1周，自由摄水摄食。动物房温度维持在22～24℃，湿度维持在65%～70%。

    1.2 药品与试剂温阳通络方(主要由附片、桂枝、麻黄、川芎、薏苡仁、赤芍、五加皮等10味中药组成)，由本院药学部提供；甲氨蝶呤片，通化茂祥制药有限公司生产(批号：H22022674)。牛Ⅱ型胶原(CⅡ)，sigma公司；完全弗氏佐剂(CFA)，美国BD公司；信号素(Sema3A)抗体(abcam，货号：ab23393)；神经纤毛蛋白-1(NRP-1)抗体(abcam，货号：ab81321)；神经丛素(PlexinA)抗体(abcam，货号：ab23391)；β-actin抗体(abmart，货号：T40104)；HRP标记通用型二抗(Goat来源，CST，货号：7074S)；蛋白酶抑制剂(Roche，货号：11206893001)；First Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas K1622)；SYBR Green master mix(KAPA KK4601)；DMEM(H)基础培养基(Gibco ......