斑点实验在结核性胸膜炎中的应用价值(1)
摘要： 目的： 对于将T 细胞斑点实验应用于结核性胸膜炎诊断中的临床价值进行深讨，为临床中的鉴别诊断提供有力依据。 方法： 对在笔者所在医院进行斑点实验检查的85例患者的资料进行回顾性分析，依照临床诊断结果将受试者分为对照组、诊断不明组及患者组3组，各组的例数分别为30例、16例、39例。上述入选患者均进行过培养滤液蛋白10、结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原 、结核抗体及腺苷脱氨酶的检查。 结果： 在患者组中有36例患者的斑点实验检测结果为阳性，其阳性率为92.3 %，诊断不明组患者的阳性率为6.2 %，对照组的检测结果均为阴性，阳性率为0.0 %。三组数据均具有统计学差异( P < 0.05)。斑点实验的检测特异性为89.7 %，相比于结核抗体及腺苷脱氨酶等指标的检查具有更高的特异性、敏感性及诊断准确率。 结论： T 细胞斑点实验在结核的快速发现及诊断中发挥着重要作用，具有很强的临床应用价值，该实验的特异性及诊断准确率优于传统的其他检查法。值得作为辅助诊断依据进行临床推广。
关键词：斑点实验;结核性胸膜炎; 临床应用;临床诊断
, 百拇医药
基金项目：湖南省卫生厅科研计划项目(B2009058);衡阳市科学技术发展计划项目(2009KJ42)
由结核分枝杆菌(M.tuberculosis )引起胸膜炎症的病变称为结核性胸膜炎，患者主要表现为胸腔积液、胸痛、呼吸困难、干咳等。目前我国出现结核性胸膜炎患者主要表现为结核性胸腔积液，且临床上对于该病的诊断缺少特异性敏感性的检测方法。胸膜活检法虽然检测特异性高，但其对人体具有创伤性而被较少应用。其他的细菌学检测法虽无创伤性但诊断准确率较低。本文报道的T细胞斑点实验不仅可以减少对病患的创伤，在检测特异性、敏感性及诊断准确率方面都大大优于其他传统方法。为诊断结核性胸膜炎，判断结核菌感染状态等提供强有力的依据。
1. 资料和方法
1.1 一般资料
选取2013年4月 ～ 2014年4年一年期间于笔者所在医院呼吸内科进行就诊的疑似或待排除结核性胸膜炎患者85例。其中男性患者55例，女性患者30例，患者年龄13 ～ 87 岁，平均年龄(37.5 ± 14.8) 岁。患者在就诊期间除进行常规检查外，同时还进行T 细胞斑点实验(T-SPOT.TB)。根据《结核病诊治指南》诊断结核性胸膜炎的标准将上述85例患者分为3组，分别是对照组(即排除患有结核性胸膜炎者，且胸片无异常，无结核病接触史)，诊断不明组(即无明确诊断结果显示其患有结核性胸膜炎者)，患者组(即符合诊断结核性胸膜炎的标准者)。三组患者在性别，年龄，文化程度等方面不存在显著差异。其中对照组30例，男性患者18例，女性患者12例，年龄15 ～ 80 岁，平均年龄(36.3 ± 15.4) 岁;诊断不明组16例，男性10例，女性6例，年龄11 ～ 90 岁，平均年龄(38.5 ± 11.8) 岁;患者组39例，男性27例，女性12例，年龄18 ～ 78 岁，平均年龄(36.5 ± 12.8) 岁。
, 百拇医药
1.2 方法
采集4～5 mL外周血，加入含肝素钠的抗凝采血管中，混匀后采用密度梯度离心法对单个核细胞进行提取分离。之后将分离的外周血单个核细胞悬液加入到含有3mL淋巴细胞的分离液试管中，采用1600G离心22分钟，吸取白细胞层，并加入11mL RPMI1640培养液，采用600G离心7分钟，除去上清液。加无血清培养基至10mL，吸取10 μL 进行细胞计数。且根据公式V=N/25 计算最终无血清培养基的加入量。此外，采用350G离心7分钟得到沉淀细胞，并用之前算好的无血清培养基量制备工作浓度的细胞悬液。将该细胞工作液、阳性对照液、培养滤液蛋白10及结核分歧杆菌早期分泌靶向抗原6分别加入微孔培养板(每份标本4孔)，在37°C 且含有5 % CO2的培养箱进行过夜培养(16～20 h)。对培养板进行PBS洗涤后加入酶标抗体和底物反应液，最后进行斑点的计数。每个斑点代表一个结核特异效应的T细胞。
1.3 斑点实验结果鉴定
, http://www.100md.com
根据试剂盒说明书对于斑点实验结果进行判读，当阴性对照孔的SFC(斑点形成细胞)≥ 6时，且检测孔的SFC值为阴性对照孔该值的两倍，则认为所测样本结果为阳性。若SFC < 6，且SFC检测孔-SFC阴性对照孔≥ 6时，则认为所测样本结果为阴性。
1.4 其他指标检查测定
结核抗体滴度值 > 400 U/mL时，判别为阳性;腺苷脱氨酶值≥ 45 U/L时，判别为阳性，且检测项中任一项结果为阳性时均判别为结果阳性。
2. 统计学方法
采用 SPSS 19.0 统计软件进行统计学数据分析，检测结果的阳性率的比较应用χ2 检验，P < 0.05 认为差异具有统计学意义。
3. 结果
, 百拇医药 3.1 3组之间SFC 阳性率的比较
在85例患者中，患者组的SFC阳性率明显高与对照组及判别不明组(P < 0.050 )。在患者组中有36例患者的斑点实验检测结果为阳性，其阳性率为92.3%，诊断不明组患者的阳性率为6.2%，对照组的检测结果均为阴性，阳性率为0.0%。具体结果见表 1。
表1 三组斑点实验检测SFC阳性率的比较结果
3.2 各种检测项目诊断结果对结核性胸膜炎的评价比较
采用结核抗体法及腺苷脱氨酶法作为判别结核性胸膜炎的指标，将结果与通过斑点实验判别的结果进行比较，结果表明斑点实验在敏感性、约登指数和特异性方面均优于结核抗体法及腺苷脱氨酶法。采用斑点实验法对于结核性胸膜炎的诊断准确率为92.3 %，高于采用腺苷脱氨酶及结核抗体作为诊断指标的准确率，且具有统计学意义。具体数据见表2。, 百拇医药(曾赛丽 谢莉 张秀峰 何振华 谭小武)
关键词：斑点实验;结核性胸膜炎; 临床应用;临床诊断
, 百拇医药
基金项目：湖南省卫生厅科研计划项目(B2009058);衡阳市科学技术发展计划项目(2009KJ42)
由结核分枝杆菌(M.tuberculosis )引起胸膜炎症的病变称为结核性胸膜炎，患者主要表现为胸腔积液、胸痛、呼吸困难、干咳等。目前我国出现结核性胸膜炎患者主要表现为结核性胸腔积液，且临床上对于该病的诊断缺少特异性敏感性的检测方法。胸膜活检法虽然检测特异性高，但其对人体具有创伤性而被较少应用。其他的细菌学检测法虽无创伤性但诊断准确率较低。本文报道的T细胞斑点实验不仅可以减少对病患的创伤，在检测特异性、敏感性及诊断准确率方面都大大优于其他传统方法。为诊断结核性胸膜炎，判断结核菌感染状态等提供强有力的依据。
1. 资料和方法
1.1 一般资料
选取2013年4月 ～ 2014年4年一年期间于笔者所在医院呼吸内科进行就诊的疑似或待排除结核性胸膜炎患者85例。其中男性患者55例，女性患者30例，患者年龄13 ～ 87 岁，平均年龄(37.5 ± 14.8) 岁。患者在就诊期间除进行常规检查外，同时还进行T 细胞斑点实验(T-SPOT.TB)。根据《结核病诊治指南》诊断结核性胸膜炎的标准将上述85例患者分为3组，分别是对照组(即排除患有结核性胸膜炎者，且胸片无异常，无结核病接触史)，诊断不明组(即无明确诊断结果显示其患有结核性胸膜炎者)，患者组(即符合诊断结核性胸膜炎的标准者)。三组患者在性别，年龄，文化程度等方面不存在显著差异。其中对照组30例，男性患者18例，女性患者12例，年龄15 ～ 80 岁，平均年龄(36.3 ± 15.4) 岁;诊断不明组16例，男性10例，女性6例，年龄11 ～ 90 岁，平均年龄(38.5 ± 11.8) 岁;患者组39例，男性27例，女性12例，年龄18 ～ 78 岁，平均年龄(36.5 ± 12.8) 岁。
, 百拇医药
1.2 方法
采集4～5 mL外周血，加入含肝素钠的抗凝采血管中，混匀后采用密度梯度离心法对单个核细胞进行提取分离。之后将分离的外周血单个核细胞悬液加入到含有3mL淋巴细胞的分离液试管中，采用1600G离心22分钟，吸取白细胞层，并加入11mL RPMI1640培养液，采用600G离心7分钟，除去上清液。加无血清培养基至10mL，吸取10 μL 进行细胞计数。且根据公式V=N/25 计算最终无血清培养基的加入量。此外，采用350G离心7分钟得到沉淀细胞，并用之前算好的无血清培养基量制备工作浓度的细胞悬液。将该细胞工作液、阳性对照液、培养滤液蛋白10及结核分歧杆菌早期分泌靶向抗原6分别加入微孔培养板(每份标本4孔)，在37°C 且含有5 % CO2的培养箱进行过夜培养(16～20 h)。对培养板进行PBS洗涤后加入酶标抗体和底物反应液，最后进行斑点的计数。每个斑点代表一个结核特异效应的T细胞。
1.3 斑点实验结果鉴定
, http://www.100md.com
根据试剂盒说明书对于斑点实验结果进行判读，当阴性对照孔的SFC(斑点形成细胞)≥ 6时，且检测孔的SFC值为阴性对照孔该值的两倍，则认为所测样本结果为阳性。若SFC < 6，且SFC检测孔-SFC阴性对照孔≥ 6时，则认为所测样本结果为阴性。
1.4 其他指标检查测定
结核抗体滴度值 > 400 U/mL时，判别为阳性;腺苷脱氨酶值≥ 45 U/L时，判别为阳性，且检测项中任一项结果为阳性时均判别为结果阳性。
2. 统计学方法
采用 SPSS 19.0 统计软件进行统计学数据分析，检测结果的阳性率的比较应用χ2 检验，P < 0.05 认为差异具有统计学意义。
3. 结果
, 百拇医药 3.1 3组之间SFC 阳性率的比较
在85例患者中，患者组的SFC阳性率明显高与对照组及判别不明组(P < 0.050 )。在患者组中有36例患者的斑点实验检测结果为阳性，其阳性率为92.3%，诊断不明组患者的阳性率为6.2%，对照组的检测结果均为阴性，阳性率为0.0%。具体结果见表 1。
表1 三组斑点实验检测SFC阳性率的比较结果
3.2 各种检测项目诊断结果对结核性胸膜炎的评价比较
采用结核抗体法及腺苷脱氨酶法作为判别结核性胸膜炎的指标，将结果与通过斑点实验判别的结果进行比较，结果表明斑点实验在敏感性、约登指数和特异性方面均优于结核抗体法及腺苷脱氨酶法。采用斑点实验法对于结核性胸膜炎的诊断准确率为92.3 %，高于采用腺苷脱氨酶及结核抗体作为诊断指标的准确率，且具有统计学意义。具体数据见表2。, 百拇医药(曾赛丽 谢莉 张秀峰 何振华 谭小武)