血管紧张素Ⅱ对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响(1)
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【摘要】目的：研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响，及其在心室重构的重要作用。方法：本研究以差速贴壁法原代分离提纯培养的SD乳鼠心肌成纤维细胞(MFs)为实验模型，DAB免疫组化法鉴定后传代培养，取第2~4代MFs分实验组(加AngⅡ10-6mol/L)和对照组(不加AngⅡ)培养；四氮唑盐(MTT)比色法检测MFs的增殖；羟脯氨酸测试盒检测MFs胶原合成量；进行统计学分析。结果：实验组MFs的A值较对照组的值明显增加(P<0.001)；实验组MFs培养上清羟脯氨酸含量较对照组的值明显增加(P<0.001)。结论：AngⅡ能够促进MFs增殖、合成分泌胶原蛋白，导致心肌纤维化，在心室重构过程中起重要作用。
【关键词】血管紧张素Ⅱ 心肌成纤维细胞 心室重构
Effect of AngⅡon the proliferation and collagen synthesis of the cardiac myofibroblasts
CHEN Tao, CHEN Shuqin, PENG Wenping, et al .Dept of Pediatrics, the Affiliated Hospital of Luzhou Medical College, Luzhou, 646000)
【Abstract】Objective: To syudy the effect of AngⅡon the proliferation and collagen synthesis of the cardiac myofibroblasts and the function of Ang Ⅱ in the process of ventricles reconstitution.. Methods : The study primary culture neonate rat MFs depending on the different time of cell adherence,use the method of DAB immunohistochemical method identifying MFs,2-4 generations MFs divided into experimental group and controlled group, experimental group add AngⅡ 10-6 mol/L and controlled group add nothing. colorimetric method of MTT detect the MFs hyperplasy; hydroxyproline test box detect the collagen content in the MFs supernatant. Results:. Under effect of 10-6mol/L AngⅡ,A value of experimental group contrast to controlled group is obviously increase(P<0.001)and the collagen content in the MFs supernatant, experimental group contrast to controlled group, is obviously increase(P<0.001). Conclusion: AngⅡ can induce MFs hyperplasy;AND has the function of inducing MFs to secrete collagen protein.
【Key Words】 angiotensinⅡ Myocardial Fibroblasts ventricular reconstitution
心室重构是心血管病重要的病理生理过程。左心室重构与心脏事件密切相关，是多种心血管并发症如冠心病、心力衰竭的独立危险因素。了解心室重构的发病机制和防止逆转心室重构日益引起国内外学者关注。在导致心室重构的众多体液因素中，AngⅡ具有非常重要的意义。本实验通过体外原代提纯培养乳大鼠(1-3d)MFs，研究AngⅡ对MFs增殖、胶原分泌量的影响，以从细胞分子水平上为心肌纤维化发生机制提供新的理论依据。现报道如下。
1材料与方法
1.1实验材料
1.1.1主要试剂：新生优级小牛血清民海生物试剂有限公司；
DMEM/F12培养基和血管紧张素Ⅱ(A9525)sigma公司；
胰蛋白酶Amresco公司；
Ⅰ型胶原酶Invitrogen公司；
ABC免疫组化试剂盒 北京中杉金桥生物技术有限公司；
四氮唑盐(MTT) 泸州医学院中心实验室；二甲基亚砜 分析纯产品；
羟脯氨酸测试盒南京建成生物工程研究所。
1.1.2实验动物：日龄1~3天的SD(Sprage Dawley)乳大鼠，由泸州医学院实验动物中心提供。
1.2实验方法
1.2.1 MFs的培养及鉴定：四只乳大鼠(1~3天)取全心脏；用PBS液漂洗干净心肌组织，剪碎成1mm3小块；消化：0 ......
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