肌肽精制工艺条件优化试验研究
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【摘要】目的 对肌肽精制过程中的工艺条件进行试验研究。方法 通过设计三因素三水平的正交试验，摸索优选最佳精制工艺条件。结果 确定精制工艺参数活性炭用量为肌肽粗品的3%，脱色反应时间为30 min，醇沉步骤乙醇用量为滤液量的120%。结论 该方法重现性好、收率较高，适用于原料药的实际生产。
【关键词】肌肽；精制；活性炭
肌肽是一种天然小肽，由β-丙氨酸和L-组氨酸构成，是具有抗氧化作用的活性物质。近年来已通过合成手段获得肌肽，随着研究领域的不断深入，学者们发现肌肽通过抵抗氧化应激、重金属螯合等机制，抑制化学性修饰和大分子聚合物的形成，从而调节全身各组织的蛋白质代谢。近年来医药领域研究工作证明，肌肽可用于预防缺血及再灌注引起的脑组织损伤〔1〕；治疗胃溃疡、烧伤、抗肿瘤〔2〕；并具有抗衰老、免疫调节作用；对眼局部治疗白内障的研究也逐渐显露头角〔3〕，并表现出对角膜组织代谢损伤和老年性白内障的功效。
肌肽的药用作用明确，但目前在国内主要用于保健、化妆品、食品添加剂等方面，将其开发成药物有着广阔的应用前景和重要的临床意义。根据国家要求，肌肽作为原料药申报需要做大量的试验研究，精制工艺是关乎原料药质量的重要技术内容，以将原料药中的杂质降低到合理的限度以下。本文对肌肽的精制工艺进行了优化及筛选，以期获得符合国家要求的精制工艺条件。
1 材料与仪器
肌肽粗品、活性炭(四川三高生化股份有限公司)；乙醇(湖南尔康制药有限公司)；集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市予华仪器有限责任公司)；高效液相色谱仪(LC-2010C，日本岛津公司)；其余抽滤装置、电子天平等均为实验室常规仪器。
2 方法与结果
2.1 精制步骤将肌肽粗品溶解于蒸馏水中，加入一定量的活性炭，加热搅拌脱色，脱色后趁热过滤除去活性炭，于滤液中加入一定量的乙醇醇沉，充分析出后将醇沉物滤出、洗涤，经干燥和烘干后得精制品。
2.2 精制品中杂质含量的测定为了检测精制过程对粗品中杂质的去除效果，对制得的精制品采用高效液相色谱法测定精制品中杂质的含量[4]。色谱条件为：流动相0.040mol/L磷酸氢二钾溶液(用磷酸调pH值至6.30)-乙腈(38：62)；色谱柱为NH2柱(200mm×4.6mm，5μm，资生堂公司)；流速1.0ml/min；检测波长210nm；柱温35℃。按主成分自身对照法计算杂质含量。
2.3 正交设计试验在对肌肽粗品的精制过程中，对精制效果有重要影响的因素有活性碳的用量(A)、脱色时间(B)和醇沉过程中乙醇量占滤液量的百分比(C)，选择这三个因素进行正交设计，每因素3水平，分别为1%、3%、5%，15、30、45min，80%、100%、120%、依照L9(34)正交表安排实验，以精制品总杂质含量为评价指标，筛选出最优的精制工艺。实验结果见表1。
表1 正交试验结果与分析
2.4直观分析以精制品中的杂质含量为指标进行直观分析，杂质含量越少，则精制品的质量越好。极差R反映各因素对指标的影响程度，R值越大对杂质含量的影响越大，反之则影响越小。主次因素顺序确定为：A > B >C。其中A因素K1> K3> K2；B因素：K1 > K3 > K2；C因素：K1 > K2 > K3。确定较优精制工艺为A2B2C3。即活性炭用量为肌肽粗品的3%，脱色反应时间为30 min，醇沉步骤乙醇用量为滤液量的120%。
3 讨论
本文采用正交设计试验优化了肌肽的精制工艺，并对优选出的工艺条件进行了验证试验。结果表明优化的精制工艺能够大幅度的降低肌肽粗品中的杂质含量，为肌肽的药用奠定了良好的基础。该方法重现性好、收率较高，易于操作控制，适用于原料药的实际生产。
参考文献
[1] 沈耀, 胡薇薇, 陈忠. 肌肽和中枢神经系统疾病. 浙江大学学报(医学版), 2007, 36 (2) : 199- 203.
[2] Nagai Kineshirou, Use of L-carnosine for tumour treatment[P] DE: 3424781, 1985, 01, 17 ......
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