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编号:12108584
胶体金法和TPPA诊断梅毒螺旋体抗体的临床效果比较研究
http://www.100md.com 2011年7月15日 刘少刚 蔡銮端 吴洁
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     【摘要】目的:比较胶体金法和TPPA对梅毒螺旋体抗体的诊断价值,为患者选择合适的坚持方法。方法:100梅毒患者例作为研究对象,按照1:40,1:80,1:160;1:320的滴度,每份样本均分别稀释为上述4个滴度,共得400份待检样本。随后平均分为TPPA组和胶体金组,TPPA组采用TPPA法检测,胶体金组采用胶体金法检测。结果:两组各滴度下检测值均无显著统计学差异。TPPA组检测值比较稳定,均在90%以上;胶体金组在1:80和1:160准确率最高,滴度过低或过高时假阴性会相应增高。结论:两种方法各有其适用范围,为了提高诊断效果,可以先用胶体金法做半定性试验,对于阳性患者,再通过TPPA法进一步确认。

    【关键词】胶体金法;TPPA法;梅毒螺旋体抗体

    近年来,虽然随着卫生防疫机构工作的逐步落实,性病监测和控制工作得到了很大发展,但随着人们性观念的改变,以及流动人口的增多,梅毒发病率依然高居不下。该病临床表现较为复杂,易被误诊或漏诊,为银屑病、斑秃等皮肤病,而且病情具有一定的反复性,给监测和治疗工作带来一定困难[1-2]。为了提高诊断效果,为患者及时治疗提供客观参考,我们对临床上应用较广的TPPA(梅毒螺旋体明胶凝集试验)和胶体金梅毒血清学检查方法做一个初步的比较分析,以便为患者筛选高效,准确的诊断方法,现报告如下。

    1资料与方法

    1.1一般资料

    选择从2008年3月到2010年本院及门诊梅毒患者100例作为研究对象,男63例,女37例,年龄18~68岁,平均32.7岁。患者均肘静脉采血加入3.2%柠檬酸钠抗凝剂,用羟乙基淀粉两次离心分离部分红细胞和多余的血浆,按照1:40,1:80,1:160;1:320的滴度,每份样本均分别稀释为上述4个滴度,共得400份待检样本。随后平均分为TPPA和胶体金组。每组均为200份样本,均含上述4个滴度的样本各50份。

    1.2方法

    TPPA组:采用日本富士公司生产的TPPA试剂盒,微量加样器取50uL待测血清和TPPA混合,用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与血清中的梅毒螺旋体抗体结合,产生肉眼可见的凝集反应,明胶颗粒为玫瑰红色,便于肉眼观察。胶体金组:采用艾康生物技术有限公司的试剂盒,将试纸条置于干净平坦的台面上,微量加样器将150uL待测血清加入XM金标测试卡样品孔内即可。

    1.3统计学处理

    相关数据采用SPSS11.5软件进行统计学分析,计数资料X2检验,计量资料t检验,以p<0.05为统计学差异具有显著性。

    2结果

    检测结果如表1所示。两组各滴度下检测值均无显著统计学差异。TPPA组检测值比较稳定,均在90%以上;胶体金组在1:80和1:160准确率最高,没有出现假阴性情况。而在滴度过低或过高时假阴性会相应增高。

    3讨论

    梅毒是由梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)感染所致的性传播疾病,可通过血液传播和性接触传播,导致患者的血液、乳汁、精液和唾液中均有TP存在。该病可造成神经系统、心血管系统等全身各组织器官的损伤,而且还可通过妊娠传给下一代,危害十分严重。TP进入机体后产生两种抗体:一种是特异性抗体(抗密螺旋体抗体) ,一种是非特异性抗体(抗心磷脂体) , 前者的检测方法主要有ELISA和TPPA法等,后者的检测方法主要有胶体金法、RPR和TRUST法等[3-5]。

    TP感染人体后,抗体可在体内持续存在,终身保留,故TPPA对各期梅毒的检测结果都有较好的稳定性,敏感性和特异性高,是目前公认的较为权威的诊断方法,因此在临床上得到广泛应用。但该方法检测时需将样本作系列稀释,操作复杂,中间过程样本容易被污染,成本较高。而且评肉眼判断结果,检测水平也操作者的技术水平有较大关系,而且不利于防疫部门大批量样本筛查,因此主要用于临床诊断。

    胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在静电作用成为一种稳定的带负电的疏水胶溶液,静电作用可吸附蛋白质,形成特异的可观察到的反应,且不影响蛋白质的生物特性。该方法操作简单,成本低廉,可作大规模的筛查工作。从临床效果来看,滴度过低和过高时均出现较高的假阴性。我们分析,由于是非特异性检测,滴度过低时,可能其他杂质蛋白也吸附到金原子上,而滴度过高时,由于样本被大量稀释,而金原子是最稳定的惰性原子,可能静电作用减弱,导致吸附作用减弱。从而出现一定的假阴性,因此,从我们的体会来看,选择合适的滴度十分重要。

    目前临床上还有一些其他的血清检测方法[6-8],如RPR检测血清中的非特异性反应素,但该反应素在疾病非活动期和治疗后容易消失,而且某些疾病如水痘,类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮以及妊娠等都可能产生非特异性抗体,而且其对二,三期梅毒检出率较低,因此一般作为判定是否已经痊愈或是否复发。ELISA操作简便,价格低廉,灵敏度和准确度高,对梅毒早期辅助诊断较好,但梅毒IgG抗体在治愈后相当长的时间内依然可能阳性,因此ELISA无法判断疾病活动状况,只能曾经感染过或正在感染。

    从临床统计来看,两组各滴度下检测值均无显著统计学差异。TPPA组检测值比较稳定,均在90%以上;胶体金组在1:80和1:160准确率最高,没有出现假阴性情况。而在滴度过低或过高时假阴性会影响增高。我们认为,两种方法各有其适用范围,为了提高诊断效果,可以先用胶体金法做半定性试验,对于阳性患者,再通过TPPA法进一步确认。

    参考文献

    [1] 曹佩琪. 四种梅毒检测方法比较[J].中国现代药物应用,2009,3(3):58.

    [2] 程艳杰,王广杰等.梅毒螺旋体血清学检测方法的实验室评价[J].中国皮肤性病学杂志,2005,19(8):503-504

    [3] 戴玉琳,冯星.对梅毒血清学研究的建议[J] ......

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