RP-HPLC法测定复方公英片中(R,S)-告依春的含量
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【摘要】目的：建立复方公英片中(R,S)-告依春的含量测定方法 方法：采用高效液相色谱法测定制剂中(R,S)-告依春的含量，色谱条件：C18柱，流动相：流动相 以甲醇为流动相A，以0.02%磷酸溶液为流动相B，依法进行梯度洗脱，检测波长为245nm。结果：(R,S)-告依春在(0.00552～0.7728)μ，范围内线性关系良好，Y = 5914216.44327 X - 24617.26673，R2= 0.9999。加样回收率为95.5%，RSD为0.25%。结论：方法简便准确，重现性好，可用于复方公英片的质量控制。
【关键词】复方公英片；高效液相色谱法；(R,S)-告依春
复方公英片具有清热解毒的功效，用于上呼吸道感染引起的发热，微恶风，有汗，口渴，鼻流浊涕，咽喉肿痛，咳吐黄痰等症。其处方由板蓝根，蒲公英两味原料药组成，原标准中无含量测定项，为更好地控制产品质量，我们对其板蓝根中(R,S)-告依春含量测定方法进行了研究，采用高效液相色谱法测定(R,S)-告依春的含量并进行了方法学验证。结果表明该法专属性好、误差小、简便可操作性强，适用于本品的质量控制。
1仪器与试药
高效液相色谱仪：岛津LC-2010液相色谱仪，紫外检测器，色谱数据处理工作站：LCsolution色谱工作站。样品与试剂：(R,S)-告依春对照品(批号 111753-200601，中国药品生物制品检定所)；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯；复方公英片由云南白药集团丽江药业有限公司(批号：20100601、20100602、20100603)，四川珍珠制药有限公司 (批号：100101059)等提供。
2方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：迪马C18柱(4.6×250mm，5μm)，柱温：25℃，流速1.0ml.min-1，检测波长：245nm，进样量30ul，流动相：以甲醇为流动相A，以0.02%磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；理论板数按(R,S)-告依春峰计算应不低于1000。
2.2对照品溶液的制备取(R,S)-告依春对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含4 µg的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备取样品20片，除去包衣精密称定，研细，取约5片重，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)50分钟，取出，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
2.4线性关系考察：精密称取(R,S)-告依春对照品适量，加甲醇制成每1ml含55.2μg的溶液，精密吸取对照品溶液各0.1、1、2、3、4、5、10、14μl，分别注入液相色谱仪，测定，结果见表2。
2.6精密度试验精密吸取同一样品溶液30μl，在同一条件下重复进样6次，以样品峰面积进行计算，结果得平均峰面积624484，RSD 0.86%，表明精密度良好。
2.7 稳定性试验取待测(云南白药集团丽江药业有限公司批号20100603)供试品溶液，按2.1项下色谱条件操作，分别在第0、2、4、6、8、10h进样，测定峰面积，按峰面积计算平均峰面积为624590，RSD为0.68%。结果表明，供试品溶液10h稳定。
2.8加样回收率试验精密称取已知含量的样品(云南白药集团丽江药业有限公司批号 20100603，(R,S)-告依春 含量36.40204μg/片) 约1.0000g，精密称取6份，精密加入(R,S)-告依春对照品溶液(55.2μg/ml)2ml，按2.3项下方法制备供试品溶液,测定。结果见表
3讨论
有关文献报道用HPLC测定板蓝根中的靛蓝、靛玉红等成分的含量，靛蓝、靛玉红为脂溶性成分，而实际生产中板蓝根多为水提取，几乎不容易提出；再者靛蓝、靛玉红又非抗病毒活性成分，因此不适合作为含量测定指标，本研究采用RP-HPLC测定制剂中(R,S)-告依春含量，精密度好，准确度高，故选择(R,S)-告依春作为复方公英片中的含量测定指标比较合适。
本试验比较了5种不同提取溶媒(甲醇、50%甲醇、20%甲醇、乙醇、水)结果表明水提取效果明显高于其它4种溶媒；以水为提取溶媒，比较了2种不同的提取方法：回流提取与超声提取，结果二者无明显差异；采用超声提取法，分别考察了不同加水量及不同超声时间的提取效果，结果加水量无明显差异，样品在超声提取50min，(R,S)-告依春提取效果最佳，故提取时间选择50min。
阴性对照溶液图谱，在(R,S)-告依春出峰位置前面有一杂质峰，为了考察这一杂质峰对(R,S)-告依春主峰的影响 ......
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