HPLC法测定卡巴拉汀贴剂中药物含量及其体外透皮释放量分析
【摘要】目的：用高效液相色谱( HPLC)法测定卡巴拉汀贴剂中药物含量及其体外透皮释放量。方法：采用Franz扩散池,用离体豚鼠皮肤为透皮屏障固定在扩散池上部,取卡巴拉汀贴剂, 揭去防粘层贴于皮肤角质层上。以pH 值为6.8的磷酸盐缓冲溶液为透皮释放接收介质, 进行HPLC分析,结果：卡巴拉汀贴剂标定含量为4.5mg，检测结果为4.45mg；卡巴拉汀体外透皮释放量在9.7~ 116.02g /mL浓度范围内线性关系良好,高、中、低3个浓度的平均回收率分别为99.79%、98.62%、98.58%。结论：使用高效液相色谱( HPLC)法测定卡巴拉汀贴剂中药物含量及其体外透皮释放量操作简便，且灵敏度和准确性高，可有效测定卡巴拉汀贴剂的中药物含量及其体外透皮释放量。
【关键词】HPLC；卡巴拉汀贴剂；药物含量及其体外透皮释放量
卡巴拉汀{(S)-N-乙基-3[(1-二甲基氨基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸苯酯} 又名为利斯的明(rivastigmine) [1]，是一种新型的乙酰胆碱酯酶抑制剂。是目前临床上应用最普遍的治疗阿尔茨海默型痴呆症状改善类药物[2]，本品的药理作用是在中枢神经系统中，通过延缓胆碱能神经元所释放的乙酰胆碱的降解而促进胆碱能神经传导，对乙酰胆碱酯酶具有选择性抑制作用。本研究通过离体豚鼠皮肤为透皮屏障，使用高效液相色谱( HPLC)法测定卡巴拉汀贴片中药物含量和体外透皮释放量，及线性关系等进行分析研究，以确定卡巴拉汀贴片的治疗效果。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 检验资料：离体健康豚鼠皮肤；卡巴拉汀贴片, 每片含卡巴拉汀4.5mg。
1.1.2 检测设备：Waters 2690高效液相色谱仪；自动进样器；Waters双波长2487紫外检测器, UV2401紫外-可见分光光度计(日本岛津公司), Millenn ium32色谱数据工作站(美国W aters公司)；TK??60B 型Franz扩散池(上海锴凯科技贸易有限公司)。
1.2 检测方法
采用Franz扩散池,将离体豚鼠皮肤为透皮屏障固定在扩散池上部,取卡巴拉汀贴剂, 揭去防粘层贴于皮肤角质层上；以pH 值为6.8的磷酸盐缓冲溶液为透皮释放接收介质，介质温度保持在32℃±0.5℃ ，磁力搅拌的转子转速为320 r /秒,从实验后2小时取样2mL，取样完毕后, 将接收液全部倒掉，补加温度相同的空白接收液，然后分别在4小时、8小时、12小时和24小时取样,每次取样完毕后,接收液按上述方法进行处理。所有样品均经0.22μm 的滤膜过滤。每次抽取样品10μL进样，在210nm检测波长下测定峰面积，进行高效液相色谱分析( HPLC)。以确定其体外透皮释放量；取卡巴拉汀透皮贴片溶解制成供试品溶液, 与对照品溶液按上述色谱条件进行测定，以确定其含量。
2 结果
卡巴拉汀在9.7~ 116.02g /mL浓度范围内线性关系良好, 检测限为0.17g /mL, 精密度为0.13% ~ 0.46%,高、中、低3个浓度的平均回收率分别为99.79%、98.62%、98.58%。卡巴拉汀贴剂标定含量为4.5mg，检测结果为4.45mg，相对标准偏差0.05mg。
3 讨论
卡巴拉汀贴剂是经透皮治疗系统(Transdermal Therapeutic Systems，TTS)给药对阿尔茨海默型痴呆进行治疗的一种给药方式，优点是一方面药物不经胃肠道，减少了药物对胃肠道的刺激作用。避免了药物经肝脏的首过效应生而产生降解，从而提高药物的生物利用度，也提高了治疗效果；另外该给药方式通过皮肤持续释放，有利于保持血药浓度的恒定，避免了其它用药方式所产生的血药浓度峰谷现象。是一种理想的给药方法；经透皮治疗后，药物以一定的透皮速率透过皮肤，进入血管后再由毛细血管吸收，从而通过血液进入体循环而产生疗效。卡巴拉汀贴剂最大的优点是方便使用或者中断使用，患者可根据病情进行选择。在临床上要达到理想的治疗效果，必须要保证药品的含量和体外透皮释放量能达到治疗的需要，因此，选择简单、有效的检测方法对卡巴拉汀贴剂中药物含量及其体外透皮释放量进行检测具有积极的意义，通过高效液相色谱( HPLC)法测定卡巴拉汀贴剂中药物含量及其体外透皮释放量操作简便，且灵敏度和准确性高，可有效测定卡巴拉汀贴剂的中药物含量及其体外透皮释放量。
近年来，随着科技的发展，新的检验设备如高压液相色谱(HPLC) 在药品的检验方面的推广应用，提高了实验室的检测水平；HPLC具有快速、灵敏，能同时进行定性和定量的优点，检测要点为：
3.1 高液相色谱的条件
通过实验表明，紫外吸收光谱中, 卡巴拉汀在210与262 nm 处有吸收峰,当pH 值大于8.5时,,卡巴拉汀出峰慢, 峰面宽从而致使峰形变差；而pH 值小于8.5时, 卡巴拉汀出峰快, 但表现出与杂质分离差；pH 值约为8.5时, 与杂技分离效果较好, 分析时间较短，因此，HPLC 测定选择210 nm为检测波长；pH 值定为8.5[3]。
3.2 卡巴拉汀贴剂中药物含量测定
取卡巴拉汀透皮贴片溶解制成供试品溶液, 与对照品溶液按上述色谱条件进行测定, 结果按外标法以峰面积计算贴片中卡巴拉汀的含量。
3.3卡巴拉汀贴剂体外透皮释放量的测定：经高效液相色谱测定后, 将峰面积换算成药物的质量浓度, 分别为90.88、41.47、31.96、17.99、10.26g /mL, 再用公式计算出一定时间内贴片单位药物的累计释放，得出结果透皮释放量与时间成良好线性关系。
综上所述，通过高效液相色谱与离体健康豚鼠皮肤对卡巴拉汀贴剂体外透皮释放量分别在2、4、8、12、24小时取样检测，卡巴拉汀贴剂在24小时内累积透皮量与时间呈线性关系, 高、中、低3个浓度的平均回收率分别为99.79%、98.62%、98.58%。证明卡巴拉汀贴剂具有良好的体外经皮渗透性能[4]。
参考文献
[1] Bejar C, Wang R H, Weinstock M. Effect of rivastigmine on scopolamine induced memory in paiment in rats[J]. European Journal of Pham acology, 1999, 383 ( 3): 231-240.
[2] Wang R H, Bejar C, Weinstock M. Gender differences in the effect of rivastigmine on brain cholinesterase activity and cognitive function in rats[J]. Neuropharm acology, 2000, 39(3): 497- 506
[3] 王芳侠, 陈赞民. HPLC法测定重酒石酸卡巴拉汀片含量[J]. 中国新药杂志, 2008, 17(19): 1700- 1702.
[4] 汤荟冬, 王瑛, 翁中芳, 等. 重酒石酸卡巴拉汀治疗阿尔茨海默病有效性及安全性的评估[J]. 上海医药, 2002, 23(8): 358-360., 百拇医药(王建祥)
【关键词】HPLC；卡巴拉汀贴剂；药物含量及其体外透皮释放量
卡巴拉汀{(S)-N-乙基-3[(1-二甲基氨基)乙基]-N-甲基-氨基甲酸苯酯} 又名为利斯的明(rivastigmine) [1]，是一种新型的乙酰胆碱酯酶抑制剂。是目前临床上应用最普遍的治疗阿尔茨海默型痴呆症状改善类药物[2]，本品的药理作用是在中枢神经系统中，通过延缓胆碱能神经元所释放的乙酰胆碱的降解而促进胆碱能神经传导，对乙酰胆碱酯酶具有选择性抑制作用。本研究通过离体豚鼠皮肤为透皮屏障，使用高效液相色谱( HPLC)法测定卡巴拉汀贴片中药物含量和体外透皮释放量，及线性关系等进行分析研究，以确定卡巴拉汀贴片的治疗效果。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 检验资料：离体健康豚鼠皮肤；卡巴拉汀贴片, 每片含卡巴拉汀4.5mg。
1.1.2 检测设备：Waters 2690高效液相色谱仪；自动进样器；Waters双波长2487紫外检测器, UV2401紫外-可见分光光度计(日本岛津公司), Millenn ium32色谱数据工作站(美国W aters公司)；TK??60B 型Franz扩散池(上海锴凯科技贸易有限公司)。
1.2 检测方法
采用Franz扩散池,将离体豚鼠皮肤为透皮屏障固定在扩散池上部,取卡巴拉汀贴剂, 揭去防粘层贴于皮肤角质层上；以pH 值为6.8的磷酸盐缓冲溶液为透皮释放接收介质，介质温度保持在32℃±0.5℃ ，磁力搅拌的转子转速为320 r /秒,从实验后2小时取样2mL，取样完毕后, 将接收液全部倒掉，补加温度相同的空白接收液，然后分别在4小时、8小时、12小时和24小时取样,每次取样完毕后,接收液按上述方法进行处理。所有样品均经0.22μm 的滤膜过滤。每次抽取样品10μL进样，在210nm检测波长下测定峰面积，进行高效液相色谱分析( HPLC)。以确定其体外透皮释放量；取卡巴拉汀透皮贴片溶解制成供试品溶液, 与对照品溶液按上述色谱条件进行测定，以确定其含量。
2 结果
卡巴拉汀在9.7~ 116.02g /mL浓度范围内线性关系良好, 检测限为0.17g /mL, 精密度为0.13% ~ 0.46%,高、中、低3个浓度的平均回收率分别为99.79%、98.62%、98.58%。卡巴拉汀贴剂标定含量为4.5mg，检测结果为4.45mg，相对标准偏差0.05mg。
3 讨论
卡巴拉汀贴剂是经透皮治疗系统(Transdermal Therapeutic Systems，TTS)给药对阿尔茨海默型痴呆进行治疗的一种给药方式，优点是一方面药物不经胃肠道，减少了药物对胃肠道的刺激作用。避免了药物经肝脏的首过效应生而产生降解，从而提高药物的生物利用度，也提高了治疗效果；另外该给药方式通过皮肤持续释放，有利于保持血药浓度的恒定，避免了其它用药方式所产生的血药浓度峰谷现象。是一种理想的给药方法；经透皮治疗后，药物以一定的透皮速率透过皮肤，进入血管后再由毛细血管吸收，从而通过血液进入体循环而产生疗效。卡巴拉汀贴剂最大的优点是方便使用或者中断使用，患者可根据病情进行选择。在临床上要达到理想的治疗效果，必须要保证药品的含量和体外透皮释放量能达到治疗的需要，因此，选择简单、有效的检测方法对卡巴拉汀贴剂中药物含量及其体外透皮释放量进行检测具有积极的意义，通过高效液相色谱( HPLC)法测定卡巴拉汀贴剂中药物含量及其体外透皮释放量操作简便，且灵敏度和准确性高，可有效测定卡巴拉汀贴剂的中药物含量及其体外透皮释放量。
近年来，随着科技的发展，新的检验设备如高压液相色谱(HPLC) 在药品的检验方面的推广应用，提高了实验室的检测水平；HPLC具有快速、灵敏，能同时进行定性和定量的优点，检测要点为：
3.1 高液相色谱的条件
通过实验表明，紫外吸收光谱中, 卡巴拉汀在210与262 nm 处有吸收峰,当pH 值大于8.5时,,卡巴拉汀出峰慢, 峰面宽从而致使峰形变差；而pH 值小于8.5时, 卡巴拉汀出峰快, 但表现出与杂质分离差；pH 值约为8.5时, 与杂技分离效果较好, 分析时间较短，因此，HPLC 测定选择210 nm为检测波长；pH 值定为8.5[3]。
3.2 卡巴拉汀贴剂中药物含量测定
取卡巴拉汀透皮贴片溶解制成供试品溶液, 与对照品溶液按上述色谱条件进行测定, 结果按外标法以峰面积计算贴片中卡巴拉汀的含量。
3.3卡巴拉汀贴剂体外透皮释放量的测定：经高效液相色谱测定后, 将峰面积换算成药物的质量浓度, 分别为90.88、41.47、31.96、17.99、10.26g /mL, 再用公式计算出一定时间内贴片单位药物的累计释放，得出结果透皮释放量与时间成良好线性关系。
综上所述，通过高效液相色谱与离体健康豚鼠皮肤对卡巴拉汀贴剂体外透皮释放量分别在2、4、8、12、24小时取样检测，卡巴拉汀贴剂在24小时内累积透皮量与时间呈线性关系, 高、中、低3个浓度的平均回收率分别为99.79%、98.62%、98.58%。证明卡巴拉汀贴剂具有良好的体外经皮渗透性能[4]。
参考文献
[1] Bejar C, Wang R H, Weinstock M. Effect of rivastigmine on scopolamine induced memory in paiment in rats[J]. European Journal of Pham acology, 1999, 383 ( 3): 231-240.
[2] Wang R H, Bejar C, Weinstock M. Gender differences in the effect of rivastigmine on brain cholinesterase activity and cognitive function in rats[J]. Neuropharm acology, 2000, 39(3): 497- 506
[3] 王芳侠, 陈赞民. HPLC法测定重酒石酸卡巴拉汀片含量[J]. 中国新药杂志, 2008, 17(19): 1700- 1702.
[4] 汤荟冬, 王瑛, 翁中芳, 等. 重酒石酸卡巴拉汀治疗阿尔茨海默病有效性及安全性的评估[J]. 上海医药, 2002, 23(8): 358-360., 百拇医药(王建祥)