附子白术配伍对AA大鼠抗炎免疫作用的实验研究
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【关键词】 附子白术；抗炎免疫
炮附子与白术配伍是汉代张仲景治疗风寒湿痹证的常用药对[1]。笔者在文献研究的基础上，以附子白术药对在仲景甘草附子汤、白术附子汤、附子汤中的原方配伍比例为依据，对佐剂性关节炎大鼠(Adjuvant Arthritis，AA)进行了免疫学方面的实验研究。报道如下:
1 实验材料
1.1 药物与试剂
炮附子、生白术购于新疆维吾尔自治区中医院中药房，雷公藤多甙片(10mgx50片)福建汇仁制药厂出品。弗氏完全佐剂(Freund’S Complete Adjuvent，FCA)，美国Sigma公司生产；大鼠TNT- 酶标检测试剂盒，购自上海晶美生物工程有限公司。
1.2 主要仪器
电子分析天平、电子千分卡尺、全自动酶标仪、台式离心机、半自动生化分析仪、恒温水浴锅等，由新疆医科大学动物实验中心及免疫教研室提供。
2 实验方法
2.1动物分组
适应性驯养一周后，1先将大鼠随机分为二组分别是：空白对照组10只; 造模组55只2 在第14天将诱发成功的关节炎大鼠48只随机分为五组附子：模型组10只、白术(3：2)组9只、 附子：白术(3：1)组10只、 附子：白术(9：4)组9只， 雷公藤多甙组10只。
2.2模型制备
造模方法参照文献[2][3]采用佐剂性关节炎(AA)大鼠模型，大鼠常规消毒后将其右后肢拉直，用注射器针头于足跖垫部皮内注射，每只大鼠注射0.1mlCFA,空白对照组大鼠右后足跖垫部皮内注射生理盐水0.1ml。
2.3药液制备
取附子75 g +白术25 g(3：1)； 附子60g +白术40 g(3：2)；附子69.2 g +白术30.8 g(9：4)； 分别加适量冷水浸泡30min 后， 按照分组及用药剂量，在常压下附子先煎1小时再加入生白术，水煎煮2次，过滤，合并两次滤液浓缩成100℅(1g/ml)的药液，4°冰箱保存备用。雷公藤多甙混悬液：将雷公藤多甙片1.5片，粉碎后，加蒸馏水20ml稀释,配成0.75℅(0.75g/ml)的混悬液。
2.4 给药方法
均采用灌胃法，与造模后第14天起分别给予附子白术不同比例水煎液，中药煎液大鼠用量10g/kg.(约2ml/只，配成浓度1g/ml)， 雷公藤多甙用量为7.5mg/kg，日一次灌胃，空白对照组及模型对照组给予2ml生理盐水，连续灌胃14天。
2.5 观察指标的测定
实验结束后，将大鼠用水合氯醛溶液麻醉后腹主动脉穿刺取血约3~5mL，做好标记，血清TNF—α采用酶标免疫法测定，使用晶美公司TNF—α免疫试剂盒.
3 实验资料统计方法
用SPSS13.0统计软件做统计分析，实验数据以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析，两两比较用LSD-t检验，均以P<0.05为具有统计学意义的判定标准。
表1 对AA 大鼠血清TNF-α的影响(x±s)
4 讨论
药对,又称“对药”“对子”,是临床常用的、相对固定的两味药物的配伍形式,是中药配伍中的最小单位。纵观仲景之经方[4-5]，其附子与白术配伍方剂达7首之多。本课题在文献研究的基础上，以附子白术药对为切入点，运用其在仲景经方中治疗痹证的白术附子汤 、甘草附子汤 、附子汤中的原方比例为依据。借助类风湿疾病模型即佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis，AA )大鼠模型来研究该药对不同配伍比例对佐剂性关节炎大鼠抗炎免疫作用的实验研究。肿瘤坏死因子(TNF-α)作为主要的前炎症细胞因子，在形成RA炎症、黏附、新生血管生成和骨质减少过程中起着重要的作用。已有研究显示RA患者血和病变关节滑液中TNF-a水平随同期关节炎活动指数的改善而显著下降，使用抗TNF-α单抗治疗后，RA患者病变关节内的滑膜炎和软骨破坏得以抑制 ......
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