正交试验法优选肾炎消白颗粒提取工艺研究
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【摘要】：目的：优选肾炎消白颗粒最佳提取工艺。方法：以提取液中黄芪甲苷的含量及总固体得率为指标，采用正交试验法，优选肾炎消白颗粒的最佳提取工艺。结果：优选的提取工艺为：70%乙醇8倍量体积，回流提取2h，共提取2次。结论：优选出的提取工艺稳定、合理、可行，适用于生产。
【关键词】正交试验法；肾炎消白颗粒；提取工艺；黄芪甲苷
肾炎消白颗粒是治疗慢性肾小球肾炎、肾病综合征的一种医疗机构制剂，由黄芪、土茯苓等12味常用中药组成的纯中药制剂，具有益气养阴、清热解毒利湿的功能。经过多年的临床实践验证其疗效确切，深受广大患者的欢迎。现行工艺是原料全部水提取浓缩后制颗粒，工艺简单，服药量大。我们根据方中药材成分的性质和现代药理学研究结果，针对脂溶性成分的药材黄芪、土茯苓、党参、熟地等用乙醇提取，药渣再与其余药材一同水提取。本处方中黄芪为君药，黄芪甲苷为其主要活性成分之一，因此本实验以黄芪甲苷的含量及浸膏得率为指标进行综合评分，采用正交试验法优选其脂溶性成分药材的提取工艺。
1仪器与材料
1.1仪器
P680HPLC高效液相色谱(美国戴安公司)、Alltech 2000-ELSD检测器；
BT205S型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)；DL-360A型台式超声仪(上海之信仪器有限公司)；
DHG-924A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)；
1.2材料
甲醇、乙腈美国天地(TEDIA)试剂公司，HPLC级；
其余试剂为国产分析纯
黄芪甲苷 (批号：10781-200512)购于中国药品生物制品检定所
黄芪、土茯苓、党参、熟地等药材均购于哈尔滨世一堂中药材饮片厂。
2试验方法与结果
2.1正交试验设计根据相关资料和有关预试验结果[1], 本实验采用L9(34)正交表,对影响提取工艺的主要因素乙醇浓度，溶剂体积，提取时间，提取次数，进行了探讨。以浸膏得率及黄芪甲苷含量为评价指标,采用综合评分法进行数据分析,其权重系数分别取0.4、0.6。因素水平表见表1。
表1醇提取工艺考察因素与水平
因素1水平23
A(乙醇浓度C)50%70%95%
B(溶媒体积V)6倍8倍10倍
C(提取时间T)1h1.5h2h
D(提取次数n)1次2次3次
2.2样品液的制备根据肾炎消白颗粒原处方比例称取上述中药材样品9份，每份约50g(其中黄芪约8g)，按照正交试验表的条件安排试验，经提取得9份样品醇提液，蒸干后用甲醇定容到100m1，再用移液管移取50ml，蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和正丁醇提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣用甲醇溶解并定容到5ml容量瓶中，备用。
2.3肾炎消白颗粒黄芪甲苷的含量测定
2.3.1色谱条件[2] 色谱柱迪马公司Diamonsil ODS(4.6mm×250mm,5μm)；流速 1.0ml/min；柱温 30℃；进样量 20μl；流动相 乙腈-水(36:64)；漂移温度 101.5℃；氮气流速 2.8L/min。
2.3.2线性关系考察精密称取干燥至恒重的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成0.4732mg/ml的溶液，摇匀即得。精密吸取上述对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl、30μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积对数值lgA为纵坐标，进样量对数值lgM为横坐标进行线性回归，得回归方程lgA=9.3991+1.4538lgM，r=0.9996。结果表明，黄芪甲苷在2.3660～14.1960μg范围内呈良好的线性关系。
2.3.3精密度实验精确吸取对照品溶液20μl，按上述色谱条件测定，连续进样5次，测定峰面积。以峰面积大小计算RSD=0.96%(n=5)，结果表明测定系统精密度良好。
2.3.4重复性实验精密称取按处方比例混合药材约25g，按2.2.项下平行制备5份样品溶液，分别进样25μl，测定黄芪甲苷的含量。经计算，黄芪甲苷含量的RSD为0.48%，表明测定方法重现性良好。
2.3.5稳定性实验精密称取同一份样品溶液，于室温下每隔4小时进样，共进样6次，经计算其峰面积的RSD=0.67%(n=6)，表明检测系统条件下，样品溶液24h内稳定性良好。
2.3.6加样回收率实验精密称取已知含量的处方比例混合药材5份，每份约25g，分别加入一定量的黄芪甲苷对照品，依法制备样品溶液，分别进样20μl，测定黄芪甲苷的含量。5个样品的加样回收率分别为99.8%，100.5%，101.4%，99.9%，98.9%，101.1%，平均加样回收率为100.3%，RSD为0.92%(n=5)。表明该测定方法结果准确。
2.3.7样品测定
2.3.7.1黄芪甲苷含量的测定精密吸取2.2.项下l～9号样品液各20μl，按色谱条件检测。(正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。)
2.3.7.2总固体得率的测定精密量取正交表中l～9号样品醇提液100ml，水浴蒸干后，于105℃干燥至恒重，再至鼓风干燥箱内105℃干燥3 h，于干燥器内冷却0.5h，精密称重，计算总固体得率。(正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。)
表2正交实验结果
实验号ABCD有效成分含量(mg/100g)浸膏率%综合
评分
111114.19221.2920.750
212228.10922.0301.064
313337.20822.8191.011
421239.52922.4231.180
5223112.79923.9511.460
623129.34123.2311.182
731326.01314.0010.741
832138.21513.7630.905
933215.39614.4990.704
K10.9420.8900.9460.971
K21.2741.1430.9830.996
K30.7830.9661 ......
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