电针对AD大鼠学习记忆及神经干细胞表达的影响
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【摘 要】 目的：探讨电针对老年痴呆大鼠学习记忆功能和神经干细胞的巢蛋白(Nestin)、碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)表达的影响。方法：成年Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型对照组、模型组、西药组、电针组,每组12只。链脲霉素(STZ)注射法造大鼠AD模型.电针治疗三个疗程。Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,免疫组化检测Nestin和bFGF表达。结果：定位航行试验显示,平均逃避潜伏期比较,AD模型组明显长于正常组、模型对照组，治疗后西药组、电针组有提高(P<0.05, .电针组大鼠海马的Nestin和bFGF)阳性细胞数目最多，与模型组相比，差异具有显著性(P<0.05)。结论：电针能够显著增强痴呆大鼠学习记忆功能, 修复AD大鼠的神经缺损，实现神经的保护效应。
【关键词】 电针；老年性痴呆；学习记忆；巢蛋白(Nestin)；碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)
老年痴呆又称阿尔茨海默病(AD)是一种常见的中枢神经系统退行性疾病，主要临床表现为进行性记忆力和认知功能减退、言语障碍、精神运动异常等症状。随着人口老龄化出现和人类寿命的普遍延长，AD对人类健康的影响受到重视，本实验采用电针治疗AD能改善认知功能和增强神经干细胞的表达，为临床治疗提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物及分组 成年Wistar雄性大鼠60只,8~10月龄,体重(240±20) g,由白求恩医大实验动物中心提供。实验动物随机分为随机分成5组：电针治疗组，用0.25mm×25mm毫针针刺“百会”穴，平刺约2.5mm，“大椎”穴，直刺约4mm。“百会”穴、“大椎”穴连接KWD-808Ⅱ型全能脉冲电疗仪，频率为30Hz，电压为2V，强度以肢体轻微抖动为度，每日1次，时间30min。10天为一疗程，间歇一天，治疗三个疗程后进行行为学测试。西药组，氢溴酸加兰他敏每日每千克体重0.5-1mg模型组，每侧侧脑室各注射链脲霉素(STZ)10µl，模型对照组，每侧侧脑室各注射生理盐水10µl。正常组。每组12只。全部实验动物用相同的饲料喂养，整个喂养过程中所使用的器皿均为非铝制品。
1.2 主要仪器及试剂
Morris水迷宫实验系统，中国医学科学院药物研究所；脑立体定位仪，NARISHIGESN-2型；氢溴酸加兰他敏，陕西森弗生物技术有限公司；华佗牌SDZ-II电针仪；Nestin，美国Biosource公司；bFGF免疫组化试剂盒，武汉博士德生物技术有限公司。
1.3 模型制作
大鼠经10%水合氯醛(3ml/kg)麻醉后，固定于SN3型脑立体定位仪。常规消毒皮肤，正中矢状切口，分离骨膜锥颅器钻开颅骨，暴露硬脑膜。微量注射器每侧侧脑室各注射链脲霉素(STZ)10µl，注射前将STZ溶于生理盐水，浓度为10%。第三天重复注射，剂量同前，正常组不予处置，模型对照组操作同前，以等量生理盐水替代(STZ)。术后水迷宫测验，常规饲养。
1.4 指标检测 行为学检测，免疫组化Nestin、bFGF检测
1.5 统计学处理 采用SPSS13•0统计软件处理。
2 结果
2.1 行为学
结果表明，治疗后西药组、电针组与模型组比学习记忆有显著提高(P<0.05)见表1。
表1 定位航行实验潜伏期( ±S) 单位(秒)
组别例数造模前造模后治疗后
正常组1248.42±10.1537.68±9.37*36.34±10.40△
模型对照组1253.76±6.0240.11±6.3534.18±7.25△
模型组1254.73±6.1894.83±12.53*99.56±8.47
西药组1252.94±8.3498.96±17.59*68.92±15.42△
电针组1254.81±5.9696.62±13.84*64.25±13.23△
注：*与模型对照组比P<0.05，△与模型组比P<0.05
2.2 免疫组化
光镜观察计数显示Nestin 和bFGF在神经细胞有表达，以胞浆、胞膜表达阳性染色为主。阳性细胞的胞浆为棕黄色，核呈蓝色。其中电针组Nestin 和bFGbFGF的表达最强，与模型组相比，差异均有显著性(P<0.05)。(见表2)
表2 大鼠Nestin 和bFGF阳性神经元数量比较( ±S)
组别例数Nestin(个/视野)bFGF(个/视野)
正常组125.61±0.9312.68±2.37
模型对照组125.98±0.7211.47±2.05
模型组128.73±1.098.83±1.53
西药组1231.94±3.3540.96±3.59
电针组1232.81±2.96*40.62±3.84△
注：*与模型对照组比P<0.05，△与模型组比P<0.05
3 讨论
神经干细胞(neural stem cell，NSC)是指能产生神经组织或来源于神经系统，具有多向分化潜能，自我复制，高度增殖能力，在特定条件诱因下，能够向特定类型神经元或神经胶质细胞分化的特殊细胞的总称。Nestin是一种新发现的中枢神经系统特有的中间丝蛋白，称为第六种中间纤维蛋白或神经巢蛋白，它是神经干细胞的特异性标志抗原[1]。中间丝具有形成和维持特定的组织细胞形态的作用，Nestin的功能是维持神经前体细胞正常形态。AD其特征性病理变化为大脑皮层萎缩，并伴有β-淀粉样蛋白沉积，神经原纤维缠结，大量记忆性神经元数目减少等。当中枢神经系统受损伤时，Nestin的重新表达能增强细胞抗损伤的能力，利于损伤灶的修复并且含有巢蛋白的细胞骨架在神经发育过程中能增加神经细胞的弹性和伸缩性，这对于NSC的增殖和迁移具有重要作用[2]。
碱性成纤维因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)由Gospodarowicz首先报道运用理化方法从牛的大脑和垂体中分离纯化出来。bFGF作为一种神经营养因子在神经再生方面有重要的意义，能保护神经元、促进神经元存活及神经细胞突起增生，保护神经细胞拮抗各种损伤的能力。AD患者大脑老年斑中含有大量的bFGF，并且bFGF能增强APP和老年斑中其它成分的合成，这些事实也提示bFGF在老年斑的形成过程中起调节作用，并参与AD神经退化过程的调控。
目前多数研究[3,4]认为NSC表达一些神经营养因子受体,局部环境能够促进它们的分化并且干细胞有能力对局部的生长分化信号做出反应 ......
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