中药蛤蟆油与其伪品的组织学鉴定
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【摘 要】 目的：通过观察研究，总结中药蛤蟆油和其伪品的组织学鉴别方法。方法：应用现代的显微鉴别和紫外灯光谱技术对蛤蟆油和其伪品药材的组织结构进行鉴别，并分析对比。结果：正品蛤蟆油的性状、显微结构和伪品的蟾蜍的有明显的不同，且正品的紫外吸收峰有三处明显的峰位置，不论是哪种伪品都无法完全的符号正品的特征吸收峰。结论：基源性状鉴别可以在正品和伪品之间出处初步的鉴别，若结合紫外光谱法检测，则可以快速、简便、准确有效的将伪品鉴别出来，值得在鉴别研究工作中参考。
【关键词】 蛤蟆油；伪品；组织学；鉴别
1中药蛤蟆油是来源于脊索动物门两栖纲蛙科(Ranidae)动物中国林蛙Rana temporaria chensinensis David雌蛙的干燥输卵管。又称为哈什蚂油哈土膜油，其性平，味甘、咸，具有补肾益精、养阴润肺的功效。蛤蟆油的有关记录可以追溯到在宋代苏颂所著的《本草图经》及李时珍著作的《本草纲目》中所载的山蛤，到目前已有近百年的历史了。中国林蛙主产于黑龙江、吉林、辽宁等省，近年来，中国水质的污染和森林资源的破坏形式日益严峻，而且蛤蟆油的特殊来源注定其产量较低，随着这些形势的加剧已经不能满足临床不断增大的应用需求量，严重影响了中药蛤蟆油的正常供应。现笔者对林蛙和蟾蜍伪品的显微鉴别和紫外灯光谱法的鉴别，分析报道如下。
1 蛤蟆油
1.1 来源：中药蛤蟆油为9～11月间在采收于东北的中国林蛙，林蛙4月下旬到9月上旬生活在潮湿的山坡树丛中，9月底至次年3月间营水栖生活。捕捉的林蛙以降霜期进行捕捉最好，选肥大的雌蛙，从其口部穿过，连成一串，悬挂风干，剥油前先用700C热水浸烫1～2min，然后立即捞出装入麻袋中，闷润过夜后次日从用刀从腹部剥开，取出输卵管，去尽卵子及其他内脏，通风处阴干。或者可以将雌蛙烫死后，直接剖腹取油，干燥，所得的药材色泽、气味较好。
1.2 林蛙形态特征：中国林蛙外形与青蛙相似，雌蛙的体长为7～9cm，雄体较小，头较扁平，长宽相等或略宽。前肢较短壮，指细长，后肢长、胫长超过体长之半，足与胫等长或略长。蹼发达，皮肤上有细小痣粒，腹面皮肤光滑。其皮肤随着季节的变化，颜色也在变化，如夏季显黄褐色，秋冬季显褐色。
1.3 药材性状鉴别：蛤蟆油呈不规则的块状，弯曲而重叠，长1.5～2cm，厚1.5～5mm，表明黄白色，呈现脂肪样光泽，偶尔带有灰白色薄膜状干皮，手摸有滑腻感。在温水中浸泡其体积可膨胀10～15倍。气腥，味微苦，嚼之有黏滑感。以色黄白，有光泽，片大肥厚，无皮膜者为佳。
1.4 显微鉴别：蛤蟆油加碘酒染色后，显微镜观察显现金黄色，腺体细胞肥大，呈长椭圆形，细胞壁明显，排列整齐。其细胞核呈椭圆形，位于细胞中间稍偏。腺体上端狭窄，底部宽，呈现圆锥形。
2 蟾蜍油
2.1 来源：蟾蜍油来源于蟾蜍科动物中华大蟾蜍的干燥输卵管。
2.2 蟾蜍形态特征：中华大蟾蜍外形和蛙相似，体长大于10cm，体位分明，颈部明显，无尾、躯干粗短。体粗壮，头宽大于长，鼻孔近吻端，眼间距大于鼻间距，前肢大于后肢之半皮肤腺瘤状突起明显，大小不均等，腹部的突起较小，皮肤极粗糙，头部较光滑，有大且长的耳后腺。体色随其生长期的不同也不尽相同，雌雄体的颜色也不相同。
2.3 药材性状鉴别：呈粉条状，弯曲盘旋或被压成块状，条形之间有明显可见的白膜相连。质坚硬有弹性，无光泽，乳白色或黄白色，断裂后容易呈段状，气味腥，味甘辛，微有麻舌感，嚼之有黏滑感。
2.4 显微鉴别：蟾蜍油细胞较小，排列不整齐，细胞核接近圆形，位于腺体内腔的一侧。其腺体的开口凹陷较明显，有较少的细小的纹理，显微镜下显示光亮的鲜艳色。
3 紫外光谱法鉴别
3.1 材料：安捷伦UV8453型分光光度计，正丁醇、石油醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、95%乙醇，所有的试剂均为分析纯试剂，药品经株洲药检所鉴定。
3.2 方法和结果：去蛤蟆油和蟾蜍油干燥药材粉末各精密称取0.2g，超声波提取，滤过，配成供试溶液，放置备用。取相应的试液作为空白液，用分光光度计测定各样品的紫外吸收，观察记录。
表一 正品和伪品蟾蜍油紫外光谱图峰位比较
药材紫外光谱吸收值
石油醚正丁醇醋酸乙酯三氯甲烷95%乙醇
正品213±3
227±1
268±2234±3
272±2269±2
253±1243±2
275±1203±2
230±4
伪品268
214
269
236
268245
268
243
274394
204
231
蛤蟆油正品的特征吸收峰值为213±3nm为最强的吸收峰，在227±1nm处有一个特征吸收峰和268±2nm出有一个较弱的吸收峰，有时这两个吸收峰会被掩盖住而不易被观察出来。伪品的特征峰均不能全部的符号正品的峰形，总是有一处或者更多的不同。
4 讨论
近年来，由于自然环境的改变和临床用药量的加剧都促使了蛤蟆油价格的上涨和资源的紧缺形势，导致其不正常销售运作。正品蛤蟆油的来源正规，其性状特征都符合国家药典中的规定，对其显微特征进行鉴别可以观察其组织内的细胞排列方式及其结构。而各种各样的伪品药材的特征则各有特点，且都不同于正品药材或者是不能完全符合正品药材在药典中的规定。
在紫外光谱的检测中，正品蛤蟆油的在不同极性的有机溶液中的溶解不同，但是经过超声波的提取和反复检测，其峰形基本可以确定，东北各地区的正品蛤蟆油的重要成分相似，差异也只是存在于某些少量的成分中，其不同的含量所导致。正品蛤蟆油和伪品的紫外光谱图显示的图谱表示，各自的化学成分组成成分上虽然也有相似的部分，但是其又有很多的不同之处，且那些显示为相同成分的组分含量也不能完全符合正品的要求，因此，这些差异可以将正伪品蛤蟆油准确有效的鉴别出来。本次实验结果中，正品蛤蟆油和伪品在各个溶剂中的提取液图谱中，每个峰的峰形、峰位置和吸收峰的书面均存在有明显的差异，具有肯定的鉴别依据，可以达到鉴别真伪品的目的。
总而言之，本次实验研究结合传统的性状、显微等组织鉴别法和紫外光谱等组织鉴别方法，可以有效的将正品蛤蟆油和伪品鉴别出来。
参考文献
[1] 侯桂兰;芦柏震;王春雷. 蛤蟆油的真伪鉴别[J].海峡药学,2007,19(20):63~64 ......
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