醋延胡索配方颗粒质量标准的研究
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【摘要】 目的：建立醋延胡索配方颗粒的质量标准。[方法] 建立了醋延胡索的薄层色谱鉴别，以及延胡索乙素的高效液相色谱法含量测定。[结果] 薄层色谱鉴别中，在供试品与延胡索对照药材色谱相应的位置上，显相同的荧光斑点；含量测定中，延胡索乙素在0.1012～1.012 µg的范围内(r＝1)呈良好的线性关系，平均加样回收率为99.28%，RSD＝1.09%(n＝6)；各阴性均无干扰。[结论] 所建立的质量标准可以作为醋延胡索配方颗粒的质量控制方法。
【关键词】 醋延胡索配方颗粒；醋延胡索；延胡索乙素
近年来，我国绝大多数的医院掀起“免煎中药”的热潮。所谓“免煎中药”，是把传统中药材进行深加工，不保留药材的外形，通过水煎煮工艺提取有效成分，制成的一种便于医院药剂科配伍、利于患者携带和服用的颗粒剂中成药。醋延胡索配方颗粒，为深圳三九医药股份有限公司生产的其中一种配方颗粒剂，在国内医院广泛应用。延胡索，为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T. Wang的干燥块茎，能活血、行气、止痛，临床上用于治疗胸胁、脘腹疼痛、跌扑肿痛等。该药材及其饮片醋延胡索的质量标准收载于《中国药典》2010年版一部[1]。然而，醋延胡索配方颗粒剂却缺乏质量标准。因此，为有效地控制该制剂的质量，本文采用薄层色谱法(TLC)对其中醋延胡索饮片进行鉴别，以及通过高效液相色谱法(HPLC)对醋延胡索配方颗粒中的延胡索乙素进行含量分析。该方法操作简便、重现性好、专属性强，灵敏度高，结果科学准确，适合作为该品种的含量测定方法。具体研究如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器 高效液相色谱仪(生产厂家：美国Agilent公司；型号：Agilent1200系列)，电子天平(Sartorius BP211D)，超声波清洗器(美国Branson公司，型号B5510E，频率40kHz)。
1.1.2 实验材料 醋延胡索配方颗粒(批号：1006091S、1006131S、1006171S)；醋延胡索药材(批号：1005381、1005382、1005383)；延胡索乙素对照品(批号：110726-200409，购于中国药品生物制品检定所)；延胡索对照药材(批号：928-200604，购于中国药品生物制品检定所)；阴性对照(辅料，由深圳三九医药股份有限公司提供)。薄层板：自制硅胶G、预制硅胶G薄层板(青岛海洋化工集团有限公司)、默克硅胶G薄层板；甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 醋延胡索的定性鉴别 取本品粉末0.5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2010年版一部附录Ⅵ B)试验，吸取上述三种溶液各2µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9：2)为展开剂，展开，取出，晾干，置碘缸中约3分钟后取出，挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰(见图1)。
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图1 醋延胡索的薄层色谱图
图2 醋延胡索配方颗粒的液相色谱图
注： (图1)1～3. 醋延胡索配方颗粒 4. 延胡索对照药材 5. 延胡索乙素对照品 6. 阴性对照
(图2)1. 延胡索乙素
2.2 延胡索乙素的含量测定
2.2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.1%磷酸(三乙胺调pH值至6.0)(53∶47)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3000。进样量为10 μl。
2.2.2 对照品溶液的制备 取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含50µg对照品溶液，即得。
2.2.3 供试品溶液的制备取本品粉末约0.5g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇(1：20)混合溶液50ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用浓氨试液-甲醇(1：20)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，蒸干，残渣加50%甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2.4 阴性对照溶液的制备 取辅料约0.5g，同“供试品溶液制备”方法操作，即得。
2.2.5 专属性试验 分别取延胡索乙素对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按“2.2.1”项下的色谱条件进样，测定，考察方法的专属性。结果表明，各成分分离度符合要求，阴性对照溶液无干扰，专属性良好。结果见图2。
2.2.6 线性关系的考察 分别精密吸取同一份对照品溶液2、5、10、15、20µl(浓度为0.0506mg/ml)按上述色谱条件测定，以峰面积积分值(Y)对延胡索乙素进样量(X)进行回归处理，分别得回归方程为Y＝826.26.X-3.6852，相关系数r＝1。结果表明，延胡索乙素在0.1012～1.012 µg的范围内，呈现良好的线性关系。
2.2.7 重复性试验 取同一供试品(批号：1006131S)6份，按上述供试品制备方法和色谱条件测定延胡索乙素峰面积，计算含量。结果延胡索乙素含量的RSD为1.31%，表明该方法重复性良好。
2.2.8 稳定性试验 取同一份供试品(批号：1006131S)溶液，自制备后分别在0、2、4、6、8、12 小时进样，测定延胡索乙素含量。结果表明，供试品溶液在12 h内稳定(RSD=0.96%)。
2.2.9 中间精密度试验 取同一供试品(批号：1006131S)，由3个不同操作者按上述含量测定方法分别测定2份，计算延胡索乙素含量。结果表明，该方法中间精密度高，受随机变动因素影响程度较小(RSD=0.59%)。
2.2.10 加样回收率试验 取同一批号的供试品(批号：1006131S；含延胡索乙素1.61 mg/g)按表1要求分别精密加入供试品和对照品6份，置具塞锥形瓶中，按上述含量测定方法测定，计算延胡索乙素的含量。结果延胡索乙素的平均回收率为99.28%(RSD=1.09%)，表明该方法准确度高。
表1 加样回收率试验结果
编号样品量
(g)测得含量(mg)对照品加入量(mg)理论含量
(mg)回收率
(%)平均回收率(%)RSD
(%)
10.25740.82160.4050.4157100.2299.281.09
20.25190.80990.4050.406899.53 ......
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