不同产地的金樱子多糖及总黄酮的含量比较
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【摘要】目的：考察不同产地金樱子中的多糖和总黄酮含量。方法：以无水葡萄糖为对照品，苯酚和硫酸为显色剂，在490nm波长下测定吸光度，按回归方程计算多糖含量。另以芦丁为对照品，硝酸铝和氢氧化钠为显色剂，在510nm波长下测定吸光度，按回归方程计算总黄酮含量。结果：不同产地金樱子多糖和总黄酮含量差异较大。结论：本文方法可作为评价不同产地金樱子药材品质提供依据。
【关键词】金樱子；多糖；总黄酮；紫外分光光度法
金樱子为蔷薇科植物金樱子Rosa laevigata Michx的干燥成熟假果[1]，又名刺藤棘、白玉带、糖罐子等。金樱子富含维生素C、B1、B2，胡萝卜素，氨基酸，无机盐，微量元素及甾体，萜类，鞣质，皂苷，碳水化合物等多种物质，其主要活性物质为多糖，黄酮类化合物，三萜及其衍生物等[3]。具有提高免疫活性，降糖降脂，抗氧化，抗菌抗炎等作用。
传统认为，金樱子以个大、肉厚、色红、有光泽、去净刺者为佳，2010版《中国药典》中，金樱子项下以紫外-可见光分光光度法测定多糖含量，并规定其果肉干燥品含多糖(以无水葡萄糖计算)不得少于25%。研究表明，金樱子中主要活性成分为金樱子多糖(RP)，此外，金樱子中所含有的黄酮类物质亦有很强的药理活性。对此，本实验通过测定不同产地金樱子的多糖及总黄酮含量，为评价不同产地金樱子药材品质提供参考依据。
1仪器、试剂和材料
1.1仪器755B紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，LUCKY数控超声波清洗器(上海声彦超声仪器有限公司)，AUY120电子天平(日本岛津)。
1.2试剂乙醇，乙酸乙酯，环己烷，甲醇，甲酸，苯酚，硫酸，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠(均为分析纯)
1.3对照品无水葡萄糖(中国药品生物制品检定所 批号：110833-200503)，芦丁(中国药品生物制品检定所 批号：100080-200707)。
1.4材料 ：金樱子药材主要来源和产地分别为广州市从化市流溪河(购于当地药农)、梅州市兴宁市(采摘于兴宁市合水水库库区)、河源市龙川县(采于龙川县麻布吉镇)、广西(购于贵港市仙芦药材市场)、四川(购于成都国际商贸城荷花池药材市场)、河南省南阳市(采于南阳伏牛山)、清远市连南县(购于连南县城南农贸市场)、云浮市云安县(购于当地菜市场)，均经广州中医药大学黄海波副教授鉴定。
2方法与结果
2.1多糖含量的测定
2.1.1对照品溶液的制备取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖0.0611g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
2.1.2标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.0ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml，分别置50ml量瓶中，各加水至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液2ml，置具塞试管中，各加4%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入硫酸7ml，摇匀，置40℃水浴中保温30分钟，取出后置冰水浴中放置5分钟，取出，以相应试剂为空白。在490nm波长下进行测定，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：A=0.0481C-0.0004，r=0.9996(N=6)。结果无水葡萄糖浓度在3.055～15.275μg/ml范围内呈良好线性关系。
2.1.3测定法取105℃干燥至恒重的不同产地金樱子肉粗粉约0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密加水50ml，称定重量，静置1小时。加热回流1小时，放冷，再次称定重量，用水补足减失重量，摇匀，滤过。精密吸取续滤液1ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密吸取2ml，置具塞试管中。照标准曲线的制备项下的方法，自“各加4%苯酚溶液1ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中金樱子多糖的重量(μg)，并计算其多糖含量。结果见表1。
2.2总黄酮含量测定
2.2.1供试品溶液的制备取105℃干燥至恒重的不同产地金樱子肉粗粉约0.5g，精密称定，置25ml容量瓶中，加60%乙醇约20ml，超声30分钟。冷却后，用60%乙醇定容至刻度。过滤，取续滤液1ml置10ml容量瓶中，加60%乙醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。
2.2.2对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品0.0103g，置50ml容量瓶中，加60%乙醇溶解，定容至刻度，摇匀，即得对照品储备液。
2.2.3标准曲线的制备精密吸取对照品溶液0.0ml，1.0ml，2.0ml，3.0ml，4.0ml，5.0ml，分别置于25ml容量瓶中，加5%的亚硝酸钠1ml，摇匀，放置6min后，加10%的硝酸铝1ml摇匀，放置6min，再加入4%的氢氧化钠10ml，摇匀，再加60%乙醇定容至刻度，摇匀，静置15min。以试剂空白为背景，在510nm波长下进行测定，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线,其回归方程为A=0.0119C+0.0037,r=0.9999(N=6)。结果芦丁浓度在8.24～41.2μg/ml范围内呈良好线性关系。
2.2.4测定法取供试品溶液1ml，照标准曲线制备项下方法，测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的重量(μg)，计算其总黄酮含量。结果见表3。
2.2.5精密度试验取芦丁对照品储备液1ml，精密吸取6份，分别置于25ml容量瓶中，加5%的亚硝酸钠1ml，摇匀，放置6min后，加10%的硝酸铝1ml摇匀，放置6min，再加入4%的氢氧化钠10ml，摇匀，再加60%乙醇定容至刻度，摇匀，放置15min。以试剂空白为背景，在510nm下测定吸光度,结果RSD=1.31%(N=6),说明本实验精密度试验良好。
2.2.6重复性实验取从化产金樱子肉粗粉约0.5g，精密称取6份，照“3.3.3.1”项下方法操作制备供试品溶液，测定吸光度，结果RSD=1.47%(N=6)，说明本法重复性实验良好。
2.2.7稳定性实验用“3.3.3.6”项下制备的供试液，每隔1小时测定一次吸光度。共测定5次，结果RSD=0.96 %(N=6)，表明芦丁在4小时内供试品吸光度无明显差异。
2.2.8回收率实验取从化产金樱子肉粗粉约0.25g，精密称取6份(总黄酮含量为0.58%)，分别加入6ml芦丁对照品储备液(加入的芦丁的量与供试品中总黄酮量的含量比约为1：1)，照“3.3.3.1”项下的方法制备供试液，按标准曲线绘制项下的相同条件进行测定。结果平均回收率为100.08%，RSD为1.65%(N=6)。
3讨论
3.1不同产地金樱子在性状上大体相同，仅在于下部收缩的程度上略有不同，地域性差异不明显。
3.2实验收集的金樱子药材，有的已切碎去核，故将所有实验样品进行去核处理，仅测定其果肉中的多糖和总黄酮含量，以避免药材因药用部位不同，造成测定结果的偏差 ......
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