小白鼠口服自制红药膏LD50测定的研究
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【摘要】目的使自制红药膏(由23味中药+17味西药结合而成治疗烧伤的外用软膏[批号：[批号：鄂药制字(2001)第CX02-017号]急性毒性试验LD50的测定用小白鼠直接口服软膏法。方法 小白鼠65只。先用8只做“预试”。其中5只从小剂量(存活剂量)按1.4的比率增幅到大剂量(致死剂量)。避免受试剂量损失，制订5个不同名称的剂量，计算出的“实际服药量”接近“计划服药量”或“标准服药量”。据数学“近似值原理”列出5个不同“标准剂量组”小白鼠死亡率。再按寇氏法(Karber氏法)算出LD50数值和可信限范围。 结果为22905~32400mg/kg，属“基本无害”药膏。结论软膏直接口服测定LD50需多次称重和计算。此试验比将软膏改变成液体剂型以满足给药途径或把软膏与饲料掺和吞食等法更合理、更准确。
【关键词】小白鼠；口服；软膏；LD50测定
化学药品的急性毒性试验，LD50的测定仍是很重要、很科学的测定手段[1][2][3]。受试药品是液体采取注射法。是固体或半固体需改变给药途径。红药膏是半固体药品，用药物的原剂型采取小白鼠直接口服测定LD50，在操作和理论上是创新和改进。报告如下：
1材料和方法
1.1材料
1.1.1动物：小白鼠65只，体重分别为20±0.2g，性别各半，月龄2m。分笼饲养7日以上，择优者试验。
1.1.2分析天平。
1.1.3塑料管为园形空芯，长8cm，直径0.15cm。配合适管芯，管芯直径弱小于0.15cm。
1.1.4垫纸：小方形薄纸。
1.1.5小白鼠固定器：本所设计，制造方法另文报导。
1.1.6塑料盘碟：装受试药膏。
1.1.7导针：直径小于0.15cm的细铁或细钢针作导针。
1.1.8药品：红药膏生产批号：20110629。置冰箱冷却3天后切成0.1×0.2cm小块放冰箱备用。
1.2方法
1.2.1分组：小白鼠65只。多备几只以补充试验中外伤或窒息致死数。
1.2.2预试：确定小白鼠正式试验时的5个口服剂量。方法是随机取健康小白鼠8只，分别给服任意值“红药膏100mg、225mg、337.5mg、357mg、482mg、782mg、813.2mg、934.23mg”。服药后观察1周，前5只存活正常，后3只因口服剂量大而死亡。据“预试”结果订出试验组5个剂量即计划服药量分别为260mg、364mg、509.6mg、713.44mg和998.82mg，组间比率为1.4。
1.2.3分组：据以上制订剂量，把50只小白鼠随机分配成5个剂量小组。小组以上述剂量而命名：为260mg组、364mg组、509.6mg组、713.44mg组和998.82mg组，每组10只。
1.2.4与软膏口服LD50相关的5个剂量概念：
1.2.4.1 计划服药量：即标准服药量。系指以上各小组应该服入的标准服药量。喂药中，盘碟等工具上附着的软膏，(即丢失的软膏)。致服入的药量小于“计划(标准)服药量”，把计算的标准服药量视为“计划服药量”。
1.2.4.2 预计损失量：喂药时碟、塑料管、包纸和垫纸上粘附的红药膏总量。通过25只小白鼠喂药后的统计，“预计损失量”约为“计划服药量”的百分之50.69±10.29，即喂药前准备药膏不可少的估计值。
1.2.4.3暂订服药量：即实际喂药量。为“计划服药量”与“预计损失量”之和。
1.2.4.4 实际损失量：操作时实际损失的总量。如附在器械上的药膏量是变数，可能比“预计损失量”高、相等或低。所以“实际损失量”是实际丢失的药量。“预计损失量”是估计损失的药量。
1.2.4.5实际服药量：即真正服药量或近似标准量。用“预计服药量”，减去“实际损失量”，等于“实际服药量”。此剂量接近各组的“标准服药量”。
1.2.5装盘：把药膏小块按已知组的“暂订服药量”即“实际喂药量”装盘。方法：把放入冰箱冷冻2-3天后稍硬的红药膏切成0.1cm×0.2cm左右的小块。再按“暂订服药量”装入已称重量的碟内置冰箱备用。
1.2.6将受试的50只小白鼠以每组10只随机按以上5个标准剂量分成5组依次编号。小白鼠无需麻醉，需用“固定器”妥当固定。头部和尾部暴露在外。
1.2.7将“垫纸”铺手术台上。再将“固定器”固定的小白鼠放在“垫纸”上，便于收集撒落的药膏。
1.2.8 取规定量软膏碎片盘，用“导针”挑起药膏小碎片，装入带管芯的塑料管内，长1.0cm~1.2cm。装毕平放“垫纸”上备用。
1.2.9 操作者左手持小白鼠的“固定器”，直立放置“垫纸”上。右手取装药的塑料管，从小白鼠口角插入缓慢推动管芯。一次少量推入，防止吞咽不协调窒息死亡。推药之初，小白鼠主动配合吞咽。如喂药量过多或时间过久，小白鼠常拒绝吞咽或因神志模糊不能吞咽。此时操作者可用塑料管尖端，轻轻将口内残留药慢慢推进，直至口腔无药膏为止。推药时，动作应轻柔缓慢，防止药膏堵塞气管致小白鼠窒息死亡。管中药膏推完后，再将碟内药膏放入塑料管内再喂。如此反复操作，直至盘中“试服量药膏”完全喂完。装药盘中会残留粘连很牢的药膏，试验前后均要称盘碟、垫纸、包纸、带芯塑料管的重量。便于计算软膏损耗量，记录“实际损失量”。喂药后的小白鼠，观察7-14天的表现。每个剂量喂10只以上。
2结果
2.1试验算出“实际服药量”与“计划服药量”有差距。以“实际服药量”为基础，据数学“近似值原理”:“近靠近，活靠小，死靠大”的原则，归靠某一“计划或标准服药量组”，得出“实际服药量”，观察7-14天。死亡情况按归靠“计划剂量组”的原则，得出小白鼠口服红药膏死亡的结果是:剂量(mg/20g)分别：260、364、509.6、713.44、998.82。动物数(ni)：10、10、10、10、10。死亡数(ri )：0、3、4、6、10。死亡率(pi)：0.0、0.3、0.4、0.6、1.0。 (因小白鼠平均体重为20g，所以口服剂量单位为mg/20g。如按照mg/kg，应增加50倍，计算不便。故按实际情况改为mg/20g)。
2.2计算：按寇氏法(Karber氏法)[2]计算如下：
3讨论
应用“LD50试验”测定“红药膏”的急性毒性试验 ......
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