人参与西洋参皂苷类成分的比较研究
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【摘要】目的：研究人参和西洋参中人参皂苷含量的差异性。方法：采用高效液相法测定人参与西洋参中的各单体皂苷含量。结果：西洋参中人参总皂苷大约是人参中的2倍以上；西洋参中人参皂苷Rb1含量远高于人参中Rb1的含量，人参皂苷Re含量是人参中Re的4.8倍，人参皂苷Rd含量是人参中Rd的2倍。而人参中人参皂苷Rg1含量是西洋参中Rg1的2.4倍，人参皂苷Rf、Rg2、Rb2的含量明显高于西洋参中相应单体皂苷的含量，而人参单体皂苷Rc、Rb3在人参和西洋参中的含量相差不大。结论：人参与西洋参的总皂苷和各单体皂苷的含量差异性较大，期望结合人参单体皂苷的药理活性，更合理地指导临床应用。
【关键词】人参；西洋参；人参单体皂苷；HPLC法
人参(Panax ginseng C.A.Mey.)和西洋参(Panax quinquefolius L.)均为五加科人参属植物，具有大补元气、补脾益肺、生津、安神益智的功效[1]。人参和西洋参均为同科同属不同种植物的根，而且主要活性成均分为人参皂苷类物质，但两者的皂苷类成分存在差异性，致使人参和西洋参的药效也不相同。
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陈英杰等[2]研究表明人参的特征性成分为人参皂苷Rf，而西洋参的特征性成分为拟人参皂苷F11。西洋参中人参单体皂苷Rb1为首，且含量远高于人参，致使西洋参具有明显的抑制中枢神经的作用[3]。人参中人参单体皂苷Rb2、Re、Rg1的含量明显高于西洋参中相应的单体皂苷，研究证明其与人参具有兴奋中枢神经，强壮筋骨及抗疲劳的作用相关[4]。人参和西洋参现广泛应用于临床，本实验对两者的单体皂苷类成分做进一步深入的比较研究，期望作为人参和西洋参鉴别的一项重要手段，同时为人参和西洋参的活性成分和药理作用的研究提供理论依据，更合理地指导临床用药。
1实验材料、仪器及试剂
1.1实验材料：人参( Panax ginseng C. A. Mey )和西洋参(Panax quinquefolius L.)的3批样品均为4年生园参，于2009年10月采集，经吉林农业大学中药材学院张连学教授鉴定均为人参和西洋参正品，样品洗净烘干至恒重，并粉碎过60目筛，备用。
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1.2主要实验仪器及试剂：RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；TG628A分析电子天平(上海皖衡电子仪器有限公司)；KQ-250B超声波清洗器(昆山市超声仪有限公司)；LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津公司)；人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Re、Rg1、Rg2、Rf、Rc、Rd对照品(中国药品生物制品检定所)，甲醇、乙醇、正丁醇、三氯甲烷、香草醛、高氯酸和浓硫酸等均为分析纯，色谱甲醇、色谱乙腈为色谱纯。
2 实验方法
2.1对照品溶液的制备：将人参皂苷对照品Rb1、Rb2、Rb3、Rg1、Rg2、Rc、Rd、Re、Rf于60℃干燥至恒重，精密称定各单体皂苷分别为10.00mg，置10ml容量瓶中，加适量色谱甲醇，超声溶解，冷却后定容，配制成1.0mg/mL的人参皂苷对照品贮备液。
2.2 标准曲线的制作：精密量取上述混合对照品溶液0.05、0.1、0.2、0.5、1.0ml，分别置1ml容量瓶中，加色谱甲醇定容至刻度，摇匀，即得系列浓度为0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml的混合标准品溶液。分别取上述标准品溶液0.5ml过0.45μm滤膜，取续滤液，备用。进样3次，每次20μl，记录色谱图。
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2.3供试品溶液的制备：取人参样品3份，每份各lg，精密称定，置于索式提取器中，用三氯甲烷加热回流3h，弃去氯仿。挥干药包，甲醇回流提取10h，回收甲醇。残渣用水溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，将其蒸干得总皂苷，用色谱甲醇溶解，定容至10mL容量瓶中，摇匀，取溶液1 ml过0.45μm滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。进样3次，每次20μl，得到色谱图。
2.4高效液相色谱分析条件：色谱柱NucleosilC18(4.6mm×150mm,5μm)；柱温30℃；流速1.0ml/ min；检测波长203Nm；进样量20μl；分析时间65min。流动相为乙腈(A)和水(B)，梯度洗脱。B相含量随时间的变化：18%—22%(0-24min)，22%—26%(24-26min)，26—32%(26-30min)，32—33.5%(30-50min)，33.5%—38%(50-65min)。
2.5精密度实验：精密量取人参皂苷对照品溶液0.1ml，置1ml容量瓶中，加色谱甲醇溶液定容至刻度，摇匀，即得系列浓度为0.1mg/ml的人参皂苷对照品溶液，重复进样6次，人参各单体皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2峰面积的RSD%分别为0.93%、0.77%、1.45%、1.27%、1.32%、1.14%、0.72%、1.08%、1.04%，结果RSD%均小于2.0%，表明精密度良好。
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2.6稳定性实验：精密称取人参供试品1.0mg，并制备溶液，分别于0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h进样，人参各单体皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2峰面积的RSD%分别为1.23%、1.578%、1.48%、0.93%、1.03%、1.26%、1.45%、1.64%、1.31%，结果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.7重复性实验：精密称取人参样品5份，每份各1g，制备供试品溶液。人参中各皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2峰面积的RSD%(n=5)分别为0.23%、1.63%、1.50%、1.24%、0.63%、0.98%、1.45%、1.82%、1.69%，结果表明方法的重复性良好。
2.8加样回收率实验：精密称取人参样品3份，每份各1.0g，分别加入1.0mg/mL的人参皂苷对照品贮备液1ml，置室温挥干，并制备样品溶液。人参各单体皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2的回收率分别为1.21%、1.09%、0.54%、0.95%、0.79%、1.08%、1.05%、1.07%、1.11%，结果表明人参各单体皂苷回收率良好。
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3结果与分析
选用上述流动相进行梯度洗脱，九种人参单体皂苷按出峰时间顺序为Rg1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd，人参与西洋参的色谱图见图1和图2。
3.1人参各单体皂苷回归方程：根据标准曲线测定结果，得到人参各单体皂苷回归方程。
Rg1 Y=0.00000015156X+0.0041383(R=0.9999) Re Y=0.00000015116X-0.0027521(R=0.9998)Rf Y=0.00000013589X-0.0085187(R=0.9992) Rb1 Y=0.00000011465X-0.0017978(R=0.9997)Rg2 Y=0.00000019365X-0.0047921(R=0.9999) Rc Y=0.00000018233X+0.0035113(R=0.9993)Rb2 Y=0.00000017150X+0.0017069(R=0.9996)Rb3 Y=0.00000016599X+0.0010782(R=0.9998)Rd Y=0.00000015003X-0.0027963(R=0.9995), http://www.100md.com(张秀丽)