抗-HCV\HCVRNA及肝功能联合检测在丙型肝炎病毒感染检测中的临床应用
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丙型肝炎是比较严重的病毒性肝炎之一，WHO估计全球有1.7亿人感染丙型肝炎病毒。在我国健康人群中抗HCV阳性率为0.7-3.1%，约3800万人。急性丙型肝炎容易慢性化，慢性丙型肝炎不经积极有效治疗易发展为肝硬化和肝癌。因此，早期正确诊断显得龙为必要[1]。目前丙型肝炎病毒(HCV)感染的检测包括血清学检测和核酸检测，前者包括HCV抗体(抗-HCV)、核心抗原检测，后者包括定性/定量RNA检测和基因型 /亚型检测[2] 。目前，临床上习惯以检测抗-HCV抗体来判断患者是否为丙肝患者，但抗-HCV产生后可长期存在，对诊断和治疗效果的评价并无太在意义[3]。丙型肝炎病毒所导致肝脏损伤情况主要靠肝功能各项检测指标。近年的许多研究表明，应用荧光定量PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA具有快速、特异、高灵敏度等优点。此方法的准确性对于丙型肝炎患者的早期确诊、疗效观察、感染人群的普查及污染源的监测均具有较高的实用价值[6]。本实验先采用ELISA检测抗-HCV怀疑HCV感染的临床标本，筛选出194份抗-HCV阳性标本(排除HAV、HBVHEV阳性)，再采用荧光定量PCR检测HCVRNA，并同时采用生化分析仪检测ALT、AST、GGT、ALP、TBA、TBIL、DBIL、PA、TP、、ALB、GLOB等肝功能水平，以探讨这些指标之间的相关性。
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1材料和方法
1.1标本来源
2011年本院门诊及住院经ELISA法判为抗-HCV阳性或在治疗的丙型肝炎病人的标本194份：其中HCV-RNA标本用EDTA-2K抗疑的血浆标本，每周二检测一次；ALT、AST标本为血清标本，每日检测；抗-HCV为血清标本，每周检测3次。
1.2检测方法
1.2.1抗-HCV采用ELISA法检测，检测试剂为上海科华生物公司提供，具体操作按SOP进行。
1.2.2HCVRNA采用荧光定量PCR：取50uL血浆离心沉淀 ，经RNA提取，逆转录后吸取5uL样本点样到PCR反应管内在ABI7500扩增仪进行PCR扩增检测。试剂由中山大学达安安基因诊断公司提供，具体操作按SOP进行，HCV-RNA含量的正常值为<1000拷贝/mL。
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1.2.3肝功能检测用HITACH7600-110全自动生化分析仪检测肝功能各项指标，具体操作按SOP进行，试剂商、采用方法和正常参考值见下表：
1.3统计学方法
用SPSS17.0，Spearman做相关性分析，P<0.05有统计学意义。
2检测结果：具体见表2
从上表中可看出，194份标本中有183份HCV-RNA含量异常，该批异常标本中有131份AST异常，异常率67.5%(r=-0.213 p=0.003)；84份GGT异常，异常率43.3%(r=-0.288 p<0.001)；47份TBA高于正常值，异常率为24.2%(r=-0.355 p<0.001)；49份PA低于正常参考值，异常率25.3% (r=-0.198 p=0.012)；86份GLOB高7低异常率44.3%( r=-0.191 p=0.013)；29份TP高7低，异常率21.6% (r=-0.029 p=0.709)；经统计分析HCVRNA与AST、GGT、PA、GLOB (P<0.05)两者之间相关性有统计学意义。有110份ALT异常，异常率为56.7%(r=-0.122 p=0.088)；24份TBIL高于正常参考值，异常率12.4% (r=-0.104 p=0.180)；24份DBIL异常，异常率12.4% (r=-0.104 p=0.180)；17份IBIL异常，异常率8.8% (r=-0.108 p=0.171)；29份TP异常，异常率21.6% (r=-0.029 p=0.709)；17份ALB低于正常参考值,异常率8.9%；16份A/G倒置(异常率8.2%；19份ALP异常,异常率8.9%。经统计分析HCVRNA与ALT、TBIL、DBIL、IBIL、TP、ALB(P>0.05)两者之间相关性无统计学意义。
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2.2讨论
本文经统计分析显示，131份AST异常，异常率67.5%(r=-0.213 p=0.003)；84份GGT异常，异常率43.3%(r=-0.288 p<0.001)，47份TBA高于正常值，异常率为24.2%(r=-0.355 p<0.001)；49份PA低于正常参考值，异常率25.3% (r=-0.198 p=0.012)；86份GLOB升高，异常率44.3%( r=-0.191 p=0.013)；HCVRNA与AST、GGT、TBA、PA、GLOB的相关性有统计学意义，且异常率很高，说明这些患者中有近一半的患者存在不同程度的肝损伤。Zechini认为，ALT水平特别是AST水平，与肝损伤的程度有关[4]，即HCVRNA水平与ALT、AST水平无相关性，表明HCVRNA含量与肝损伤相关，但是不能反映肝脏损伤的程度[4]。
从表2中得知，194份HCV-RNA阳性病例中，大部份病例的RNA含量集中在103-106拷贝/mL之间，共有175例(占90%)，达到107且拷贝/mL的仅占8例，<103拷贝/mL 的仅有11例。生化指标中ALT、AST、GGT、GLOB的异常率也主要集中在106以内，AST、GGT、TBA、PA异常率在HCV-RNA103-104拷贝/mL时达高峰，说明由于HCV病毒的长期持续感染，肝细胞逐渐损伤破坏，反映了HCV病毒引起肝细胞慢性损伤的过程，特别是86份GLOB升高，异常率44.3%( r=-0.191 p=0.013)；HCVRNA 与TBA(r=-0.355 p<0.001)，说明有部份患者肝细胞损伤严重或向慢性肝炎转化。HCV--RNA达到107且拷贝/mL的仅占8例，各项生化指标在这个阶段的异常率较低，病毒载量与生化指标不一致，可能的原因是首先病例少不具有代表性，其次可能是处在HCV感染的“窗口期”，此时HCV-RNA含量很高，但生化指标还没发生变化或是变化很轻微。本资料显示，当HCV-RNA<103拷贝/mL(共11例)时，各生化指标也处于较高水平，其原因有待进一步研究。
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机体感染HCV后产生抗-HCV抗体的时间为1-7月，平均3个月，抗体检测具有简单、方便、快速、经济等特点[1]，抗-HCV产生是病毒感染的间接证据，不能区别是现症感染还是病毒已被清除，不能作为抗病毒治疗的适应症。抗-HCV“窗口期”较长，而血清中RNA出现较早，从感染到能检测到RNA “窗口期”只有1周左右[4]。HCV-RNA能反映病毒复制与传染性，有确诊价值和用于抗病毒治疗疗效的评估[5] ，应用荧光定量PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA具有快速、特异、高灵敏度等优点，此方法的准确性对于丙型肝炎患者的早期确诊、疗效观察、感染人群的普查及污染源的监测均具有较高的实用价值[6]。杨瑞锋等[2]认为HCVRNA阳性是慢慢性丙型肝炎抗病毒治疗的适应症，只有RNA检测阳才考虑进行治疗，基线RNA水平与治疗预后相关，高病毒载量的预后不及低病毒载量。早期感染、传染性评估、疗效观察、预后评估需要进行HCVRNA检测；肝功能损伤情况需靠肝功能各项指标联合检测，单一指标并不能完全反映肝脏受损情况，ALB半衰期长(21天)，多在病情较重时才发生变化，但PA是肝细胞合成的快速转运蛋白之一，半衰期短(仅1.9天)，它能更敏感的反映肝脏的合成功能，它比ALB更能反映肝细胞损伤；TBA若持续升高说明患者肝细胞损伤严重或向慢性肝炎转化。因此，判断肝功损伤情况要靠多种生化指标综合检测。
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综上所述，抗-HCV、HCVRNA和肝功能联合检测在临床上有重要价值。
参考文献
[1]叶惠英.63例丙型肝炎患者血清抗-HCV与HCV-RNA检测结果分析.中国慢性病预防与控制，2009，17(5)：533.
[2]杨瑞锋，魏来. 丙型肝炎病毒感染的检测.临床肝病杂志，2011，27(1)：1-5.
[3]陈作芬，曹永平.丙肝患者治疗前后HCVRNA与抗-HCV及丙氨酸氨基转移酶水平的分析.检验医学与临床，2010，7(12)：1175.
[4]叶剑荣，袁利群.丙型肝炎患者HCV RNA与转氨酶的关系.当代医学，2010，16(12)：79-80.
[5]杨东亮.丙型肝炎病毒学检测指标及临床意义[J].中华肝病杂志，2004，12(2)：104.
[6]陈文思，李刚，陈雪娟等.荧光定量聚合酶链反应在丙型肝炎病毒感染检测中的应用.基因诊断，2002，12(4)：8-9, 百拇医药(刘厚昌刘映祥谢金荣)