晚期转移性乳腺癌血浆MMP-2、MMP-9检测与化疗疗效相关性研究(2)
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参见附件。
样品制备：患者血浆适量直接与2XSDS样品缓冲液等体积混匀进行以下实验。
电泳：将制备好的样品置于37℃水浴中孵育30 min，稍离心后上样，进行SDS-PAGE电泳。
电泳结束后，取下凝胶，放入平皿中，用洗涤缓冲液在室温摇动下洗涤1 h，其间换液一次。然后加入孵育缓冲液没过胶面，用保鲜膜保好平皿，至37℃恒温箱中，其间换液一次，24 h后取出，弃去孵育缓冲液，加入0.1%考马斯兰染液染色约30 min，回收染液，加入脱色液脱色至蓝色背景和白色条带均十分明显时，用5%乙酸中止脱色。干燥封胶。
用凝胶图象处理系统分析结果：以白色条带的净光密度值相对定量样品中酶的活性。
3 讨论
恶性肿瘤的侵袭和转移是多阶段、多步骤、多因素和多基因等综合作用和发展的过程。在恶性肿瘤的侵袭和转移过程中会遇到一系列的组织屏障，这些屏障由细胞外基质(extracellular matrix，ECM)中的基底膜及间质、基质所组成，不同的基质成分是由不同的蛋白水解酶(proteolytic enzymes)降解的。水解酶来自瘤细胞自身分泌，也可由局部宿主细胞受诱导而分泌，还可以是基质内原本存在的酶前体激活所致。肿瘤细胞通过其表面受体与细胞外基质成分粘附后， 激活和释放各种蛋白水解酶降解细胞外基质成分 ......
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