衍生气相色谱法测定甲磺酸伊马替尼中甲磺酸烷基酯类(1)
[摘要] 目的 建立衍生气相色谱法同时检测甲磺酸伊马替尼中的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯三种甲磺酸烷基酯。 方法 采用NaI-H2O碘化衍生，利用ZB-WAX石英毛细管柱(30m×0.53mm，1.0μm)分离，氢火焰离子化(FID)检测器。 结果 方法在0.070～13.0 μg/mL具有良好的线性(r>0.999)，检出限0.2ppm，回收率94.1%～111.3%。 结论 该方法可用于甲磺酸伊马替尼中甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯三种甲磺酸烷基酯成分的同时碘化衍生分离分析，方法简便，结果可靠、重现性好。
[关键词] 甲磺酸伊马替尼；衍生化；气相色谱；甲磺酸甲酯；甲磺酸乙酯；甲磺酸异丙酯
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616(2013)17-128-03
甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)化学名称为4-[(4-甲基-1-哌嗪)甲基]-N-[4-甲基-3-[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]苯基]-苯胺甲磺酸盐，是一种高效特异的酪氨酸激酶抑制剂[1]。在合成工艺中用到甲醇、异丙醇，片剂生产中用到乙醇溶剂，在生产过程中，有可能与甲磺酸产生具有基因毒性的甲磺酸烷基酯类：甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯[2-3]。
近几年基因毒性杂质成为人们关注的焦点[4]，甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸类物质与微量的低级醇在合成反应中生成烷基磺酸酯如甲磺酸甲酯(MMS)、甲磺酸乙酯(EMS)、异丙基甲磺酸酯(IMS)、正丁基甲磺酸酯(NBMS)[5]，以及芳基磺酸酯如苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、对甲苯磺酸酯(MP-TS)，这些物质可与DNA发生烷基化反应[6-7]，从而可能成为引发癌症的诱因，因此控制药物中该类杂质的毒理学关注阈值(TTC)水平非常重要[8-9]，欧洲医药评价署(EMEA)，美国食品和药物管理局(FDA)及国际药品注册协调会议(ICH)先后对基因毒性杂质做出限度规定。
由于本品中甲磺酸烷基酯类的限度在中国药典没有规定，有必要对样品中的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯的残留量进行检测，本方法参考欧洲药典，采用衍生化的方法[10]，通过检测碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷来确定甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯的量。
1 仪器与试剂
仪器：电子分析天平，梅特勒XS105；Agilent 7890 GC气相色谱仪，顶空进样器G1888；安捷伦色谱工作站；色谱柱：ZB-WAX(30m×0.53mm×1.0μm)。试剂：甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇均为分析纯是国药集团化学试剂股份有限公司。
2 试验过程与结果
2.1 色谱条件
按照气相色谱法(中国药典2010年版二部 附录Ⅴ E)，用聚乙二醇20M交联聚合物为固定相(或极性相似)的毛细管柱(ZB-WAX 30m×0.53mm×1.0μL)，氢火焰离子化(FID)检测器，进样口温度110℃；检测器温度260℃；柱温40℃维持10min，以每分钟20℃的升温速率升至160℃维持3min；顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30min。取对照品溶液与供试品溶液分别顶空进样，进样体积3mL，记录色谱图，按碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷的出峰顺序；按外标法以峰面积计算。
2.2 试验溶液配制
供试品溶液配制：取本品适量，精密称定，按供试品与乙腈100︰1(mg︰mL)的比例配置供试品溶液，溶液经超声、薄膜过滤处理后，精密移取2mL加入顶空瓶中，加入3mL水、6g碘化钠后，扎盖密闭，作为供试品溶液。
对照品溶液配制：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈制成每毫升含甲磺酸甲酯10μg、甲磺酸乙酯10μg、甲磺酸异丙酯10μg的溶液，精密移取2mL加入顶空瓶中，加入3mL水、6g碘化钠后，扎盖密闭，作为对照品溶液。
2.3 系统专属性试验
精密称取甲磺酸甲酯99.2mg、甲磺酸乙酯102.8mg、甲磺酸异丙酯104.8mg分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，标记为1#、2#、3#溶液。
分别移取1#、2#、3#溶液各1mL分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，标记为4#、5#、6#液。
分别移取1#、2#、3#溶液各1mL置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液，标记为7#液。
分别精密移取4#、5#、6#、7#液各2mL分别置入顶空瓶中，并分别加入3mL的水、6g的碘化钠，扎盖密闭，分别标记为A甲磺酸甲酯衍生化测试液、B甲磺酸乙酯衍生化测试液、C甲磺酸异丙酯衍生化测试液、D对照品溶液，分别进样A、B、C、D溶液，记录色谱图。从表1可见，被测溶剂各峰的保留时间与对照品中各峰保留时间接近，最小分离度为3.1，符合实验要求，表明各溶剂的专属性强，专属性色谱图见图1。
2.4 定量限与检测限
精密称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，置100mL量瓶中，用乙腈溶解制成溶液，作为储备液。逐步稀释储备液，进行样品衍生化，并分别进样至信噪比(峰高/基线噪声)为3左右为检测限，至信噪比为10左右为定量限，结果见表2。由表2可见，该检测方法最小可准确检测0.6ppm的量，表明本方法对碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷可以准确定量检测。
2.5 线性关系试验
精密称取甲磺酸甲酯100.1mg、甲磺酸乙酯103.3mg、甲磺
酸异丙酯107.8mg，分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释定容。各移取上述溶液1mL置5mL量瓶中，用乙腈稀释至刻表度作为贮备液；分别精密移取贮备液0.3、0.6、0.9、1.2mL分别置于20mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为2#、3#、4#、5#液。移取上述溶液各2mL分别置入顶空瓶中，并分别加入3mL水、6g碘化钠，扎盖密闭，平行制备2份。分别进样上述溶液，平行2次进样，取峰面积的平均值与相应浓度回归，实验数据记录及线性回归方程见表3。, http://www.100md.com(连小刚 李孝壁 程红艳)
[关键词] 甲磺酸伊马替尼；衍生化；气相色谱；甲磺酸甲酯；甲磺酸乙酯；甲磺酸异丙酯
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616(2013)17-128-03
甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)化学名称为4-[(4-甲基-1-哌嗪)甲基]-N-[4-甲基-3-[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]苯基]-苯胺甲磺酸盐，是一种高效特异的酪氨酸激酶抑制剂[1]。在合成工艺中用到甲醇、异丙醇，片剂生产中用到乙醇溶剂，在生产过程中，有可能与甲磺酸产生具有基因毒性的甲磺酸烷基酯类：甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯[2-3]。
近几年基因毒性杂质成为人们关注的焦点[4]，甲磺酸、苯甲磺酸等磺酸类物质与微量的低级醇在合成反应中生成烷基磺酸酯如甲磺酸甲酯(MMS)、甲磺酸乙酯(EMS)、异丙基甲磺酸酯(IMS)、正丁基甲磺酸酯(NBMS)[5]，以及芳基磺酸酯如苯磺酸甲酯(MBS)、苯磺酸乙酯(EBS)、对甲苯磺酸酯(MP-TS)，这些物质可与DNA发生烷基化反应[6-7]，从而可能成为引发癌症的诱因，因此控制药物中该类杂质的毒理学关注阈值(TTC)水平非常重要[8-9]，欧洲医药评价署(EMEA)，美国食品和药物管理局(FDA)及国际药品注册协调会议(ICH)先后对基因毒性杂质做出限度规定。
由于本品中甲磺酸烷基酯类的限度在中国药典没有规定，有必要对样品中的甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯的残留量进行检测，本方法参考欧洲药典，采用衍生化的方法[10]，通过检测碘甲烷、碘乙烷和2-碘丙烷来确定甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯和甲磺酸异丙酯的量。
1 仪器与试剂
仪器：电子分析天平，梅特勒XS105；Agilent 7890 GC气相色谱仪，顶空进样器G1888；安捷伦色谱工作站；色谱柱：ZB-WAX(30m×0.53mm×1.0μm)。试剂：甲醇、丙酮、乙酸乙酯、甲苯、异丙醇均为分析纯是国药集团化学试剂股份有限公司。
2 试验过程与结果
2.1 色谱条件
按照气相色谱法(中国药典2010年版二部 附录Ⅴ E)，用聚乙二醇20M交联聚合物为固定相(或极性相似)的毛细管柱(ZB-WAX 30m×0.53mm×1.0μL)，氢火焰离子化(FID)检测器，进样口温度110℃；检测器温度260℃；柱温40℃维持10min，以每分钟20℃的升温速率升至160℃维持3min；顶空瓶平衡温度为80℃，平衡时间为30min。取对照品溶液与供试品溶液分别顶空进样，进样体积3mL，记录色谱图，按碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷的出峰顺序；按外标法以峰面积计算。
2.2 试验溶液配制
供试品溶液配制：取本品适量，精密称定，按供试品与乙腈100︰1(mg︰mL)的比例配置供试品溶液，溶液经超声、薄膜过滤处理后，精密移取2mL加入顶空瓶中，加入3mL水、6g碘化钠后，扎盖密闭，作为供试品溶液。
对照品溶液配制：取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，精密称定，用乙腈制成每毫升含甲磺酸甲酯10μg、甲磺酸乙酯10μg、甲磺酸异丙酯10μg的溶液，精密移取2mL加入顶空瓶中，加入3mL水、6g碘化钠后，扎盖密闭，作为对照品溶液。
2.3 系统专属性试验
精密称取甲磺酸甲酯99.2mg、甲磺酸乙酯102.8mg、甲磺酸异丙酯104.8mg分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，标记为1#、2#、3#溶液。
分别移取1#、2#、3#溶液各1mL分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，标记为4#、5#、6#液。
分别移取1#、2#、3#溶液各1mL置100mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，作为对照品溶液，标记为7#液。
分别精密移取4#、5#、6#、7#液各2mL分别置入顶空瓶中，并分别加入3mL的水、6g的碘化钠，扎盖密闭，分别标记为A甲磺酸甲酯衍生化测试液、B甲磺酸乙酯衍生化测试液、C甲磺酸异丙酯衍生化测试液、D对照品溶液，分别进样A、B、C、D溶液，记录色谱图。从表1可见，被测溶剂各峰的保留时间与对照品中各峰保留时间接近，最小分离度为3.1，符合实验要求，表明各溶剂的专属性强，专属性色谱图见图1。
2.4 定量限与检测限
精密称取甲磺酸甲酯、甲磺酸乙酯、甲磺酸异丙酯适量，置100mL量瓶中，用乙腈溶解制成溶液，作为储备液。逐步稀释储备液，进行样品衍生化，并分别进样至信噪比(峰高/基线噪声)为3左右为检测限，至信噪比为10左右为定量限，结果见表2。由表2可见，该检测方法最小可准确检测0.6ppm的量，表明本方法对碘甲烷、碘乙烷、2-碘丙烷可以准确定量检测。
2.5 线性关系试验
精密称取甲磺酸甲酯100.1mg、甲磺酸乙酯103.3mg、甲磺
酸异丙酯107.8mg，分别置100mL量瓶中，用乙腈稀释定容。各移取上述溶液1mL置5mL量瓶中，用乙腈稀释至刻表度作为贮备液；分别精密移取贮备液0.3、0.6、0.9、1.2mL分别置于20mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，作为2#、3#、4#、5#液。移取上述溶液各2mL分别置入顶空瓶中，并分别加入3mL水、6g碘化钠，扎盖密闭，平行制备2份。分别进样上述溶液，平行2次进样，取峰面积的平均值与相应浓度回归，实验数据记录及线性回归方程见表3。, http://www.100md.com(连小刚 李孝壁 程红艳)