张喜库 刘桐辉

    吉化集团公司总医院药剂科，吉林吉林 132022

    冬虫夏草特异性PCR鉴定方法研究

    张喜库 刘桐辉

    吉化集团公司总医院药剂科，吉林吉林 132022

    目的 建立一种准确、简便的方法鉴别冬虫夏草真伪。 方法 采用改良CTAB法从冬虫夏草样品中提取总DNA，根据rDNA中ITS1区序列设计一对特异性引物，对虫草样品进行特异性扩增。 结果 冬虫夏草标准品和部分市售虫草样品能扩增出255bp大小的目的片段，其余虫草样品未能扩增出相应条带。 结论改良CTAB法提取DNA所需时间短对DNA分子破坏性小。特异PCR鉴别冬虫夏草真伪的方法准确快捷，对珍贵药材的甄别具有广阔的前景。

    冬虫夏草；改良CTAB法；PCR

    本品为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(BerK.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的干燥复合体[1]，俗称虫草。其主要产于西藏、青海、云南、四川等高海拔地区，以丰满肥大，外色黄亮，内部色白者为佳[2-3]。《本草丛新》中记载冬虫夏草性温味甘，具有补虚损、益精气、化痰止咳的功效，与人参、鹿茸齐名并誉为中国的三大补药[4-5]。中医常用于久咳虚喘，产后虚弱、阳痿阴冷等“虚”的病症[5-6]，是我国名贵的中药材。虫草所含化学成分丰富，特别是虫草多糖，可通过影响细胞的增殖、分化及分泌，提高细胞免疫和体液免疫功能，增强人体免疫力，进而发挥抗肿瘤作用[7-10]。虫草中的蛋白质、氨基酸以及30余种微量元素是改善心脑血管功能、降低血糖的必要成分[7-13]。由于冬虫夏草功效独特，且人工抚育技术尚未成熟，原材料供不应求，市场上也常常出现人工伪制虫草以次充好的现象，致使药源市场上鱼龙混杂、真假难辨。因此，准确鉴别冬虫夏草的真伪具有十分重要的意义。本文借鉴前人对冬虫夏草的研究，建立了一种快速简便、准确灵敏的鉴别方法，为虫草的甄别提供新的科学依据。

    1 材料与方法

    1.1实验材料

    冬虫夏草标准品(中国食品药品检定研究，批号201103)；蛹虫草(吉林省食品药品检验所鉴定)；人工伪制虫草(吉林省食品药品检验所鉴定)；待测样品购于吉林市各大药店。

    1.2主要化学试剂

    2×CTAB[2% CTAB 2g，1.4mol/L NaCl 8.18g ......