何正枝 林 冰 甄锦壮 严红莲

    广东医科大学顺德妇女儿童医院 (佛山市顺德区妇幼保健院)生殖科，广东佛山528300

    体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中选择整倍性胚胎移植后即使植入成功也并非都能获得持续妊娠，表明胚胎发育潜力也不能仅通过染色体的状态来评估[1]，应继续探讨新的预测评估胚胎发育潜力指标，提早进行干预治疗将能改善胚胎结局。本研究通过检测2018年12月～2020年4月共94例周期患者卵泡液游离DNA(cfDNA)、血管内皮生长因子(VEGF)含量与胚胎发育质量的关系，探讨其在预测胚胎发育潜力的临床应用价值。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料

    选取2018年12月～2020年4月在本院接受辅助生殖技术助孕的94例周期患者，纳入标准：(1)辅助生殖技术助孕适应证为输卵梗阻/缺如；(2)在研究期间行常规IVF-ET患者的第一个周期。排除标准：(1)男方取卵日因精液质量下降严重、睾丸取精、受精低下等行卵泡浆内单精子注射技术；(2)取卵日未获得卵母细胞；(3)女方有可能影响卵子质量的基础疾病。共纳入94例周期患者，年龄23～44岁，按照年龄分组,年龄≥35岁的患者为研究组(n=44)，年龄<35岁的患者为对照组(n=50)。女性患者卵巢储备功能基本处于正常范围，男方精液基本正常。本研究通过本院医学伦理委员会批准，且与患者签署书面知情同意书。

    1.2 方法

    1.2.1 卵泡液收集 取卵日手术医生对直径>17mm的卵泡优先进行穿刺，将取得的第一管颜色清亮的卵泡液传递到胚胎实验室。捡取卵丘冠复合物后将卵泡液以3000r/min、10min离心，留取上清液，-80℃保存待检。

    1.2.2 卵泡液cfDNA检测 购自上海吉泰依科赛生物科技有限公司的EXKubit dsDNA HS分析试剂盒，使用Qubit3.0荧光检测仪按照操作说明书进行检测，记录数据。

    1.2.3 卵泡液VEGF检测 购自武汉博士德Human VEGF PicoKine ELISA Kit试剂盒，HR801酶标仪读取吸光度，根据标准品得出的曲线进行数值计算。

    1.2.4 胚胎质量参数收集

    1.2.4.1 受精卵观察 参照 Nasiri[2]的分级法：根据卵胞质内原核数量、合子中核的位置、大小、排列及核内核仁的数目、大小、分布情况对受精卵进行评估 ......