王 倩 折瑞莲 沙文琼 林湖滨

    深圳市人民医院产科，广东深圳 518020

    代谢性疾病是肥胖人群健康的主要威胁，通过多种方法寻找克服肥胖问题仍然不能有效合理调控肥胖人群肝脏细胞代谢平衡[1-2]。脂肪与肥胖相关基因(fat mass and obesity-associated，FTO)于1999年被发现，2007年经鉴定其编码为去甲基化酶[3-4]。随着研究的深入，发现FTO 与多种疾病有关，如代谢紊乱、肿瘤、肥胖、心脑血管疾病等[5-7]。FTO 编码去甲基化酶，其底物是RNA，催化RNA 上的6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine，m6A)发生去甲基化，调控基因表达，参与细胞的多种生命活动[8]。FTO 在不同组织中的功能不同，如在黑色素瘤、宫颈癌、乳腺癌、急性髓性白血病中具有癌基因的功能；在肝内胆管癌、卵巢癌、肾癌则发现其具有抑癌基因的作用[9-10]。对于正常肝细胞的代谢调控作用尚不清楚，本研究采用正常肝细胞HL-7702，研究FTO 如何通过m6A 调控肝细胞增殖、脂肪代谢相关基因水平变化，为脂肪肝等肝脏疾病提供治疗与指导。

    1 材料与方法

    1.1 一般材料

    RPMI-1640 培养基(KGM31800)、CCK-8 试剂(KGA317)、TMG、cycloleucine 均购自南京凯基；m6A甲基化检测试剂盒(ab233488)、甘油(ab133130)均购自Abcam；甘油检测试剂盒购自Elabscience(E-BCK261-M)；胎牛血清购自杭州四季青(11011-8611)；FTO-OE 过表达载体购自广州基旦生物；FTO-sh干扰载体购自广州艾基生物；RT-qPCR 反转录试剂盒购自Bio-Rad(1725121)；qPCR 引物购自上海生工。抗体购自CST 公司；人肝正常细胞HL-7702 购自武汉普诺赛公司(CL-0111)；293T 细胞购自中国科学院上海细胞库(GNHuh7)；SDSPAGE 凝胶试剂盒(P0012A)、蛋白裂解液RIPA(P0013C)均购自碧云天；lipofectamine 2000(11668030)、TRIzol(1590618)均购自Invitrogen ......