毛细管电泳测定尿液中7种核苷含量
硼砂,仪器与材料,1仪器,2材料,方法与结果,1对照品溶液的制备,2样品处理,3电泳条件,4样品中各核苷峰的确定,5标准曲线定量,检测限与定量限,6精密度,稳定性实验,7加样回收率实验,8样品分析,讨论
曹志龙(武警兵团总队医院 新疆 乌鲁木齐 830011)
核苷,作为维持细胞生命活动所需的基本物质是核酸的主要组分,核苷及其衍生物均具有显著的生理功能[1],机体中除含有基本的正常代谢核苷(腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶及尿嘧啶)外,还有大量修饰核苷,包括次黄嘌呤、假尿核苷等。修饰核苷[2-3]是正常核苷在机体内特异酶作用下生成的不易被磷酸酯化的产物。修饰核苷十分稳定,在尿中可以被定量排泄,因此尿中修饰核苷的排泄往往反映了机体RNA降解速率。正常人核苷排放浓度差异很小,但当机体发生病理性变化如细胞癌变时,核糖核酸周转会加快,尿液中各种修饰核苷的含量相应增加,因此定量快速分析各种核苷类成分的含量可以对癌症的发病进行诊断[4-6]。
高效液相色谱技术是最常见的分析尿中核苷的分析方法。蒋玉萍[7]等采用反相高效液相色谱法分别对宫颈癌、卵巢腺癌、卵巢胚胎癌患者尿中假尿核苷的水平进行测定,结果显示尿中假尿核苷可以作为区分良性、恶性卵巢肿瘤的重要标志物。近年来,高效毛细管电泳分析技术由于有着分离效率高、分析时间短、样品用量少、自动化程度高等优点已被广泛应用于尿液、中药等物质中核苷类化合物的分析[8-10]。
本文采用高效毛细管电泳法对尿液中7种核苷类成分进行定性定量分析,希望建立一种快速检测尿液中核苷的分析方法,为癌症患者的早期确诊及于临床监测提供数据支持。
1.仪器与材料
1.1 仪器
Beckman P/ACE MDQ型高效毛细管电泳仪,配二极管阵列检测器(DAD)及32Karat软件控制仪器操作(美国);雷磁PHS-2F型酸度计(上海精科公司);KQ-500DE型数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);Mettler Toledo十万分之一分析天平(瑞士Mettler-Toledo公司) ......
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