廖致红，代小丽，吴春凤，刘志华，李丽敏，徐 鹏，沈开元

    (柳州市人民医院检验科 广西 柳州 545001)

    杆状病毒是一种基因组为80 ～160 kb 的环状DNA 双链病毒。根据包涵体的形态和病毒诱导的细胞病理学特征，杆状病毒分为核多角体病毒属(nucleopolyhedrovirus,NPV)和颗粒病毒属(granulovirus, GV)。杆状病毒表达系统(baculovirus expression vector systerm, BEVS)是一种利用杆状病毒作为载体，转染昆虫培养细胞或虫体中表达外源蛋白的真核表达系统。杆状病毒具有宿主专一性，其在自然条件下不能感染脊椎动物，生物安全性好；利用真核生物昆虫的细胞作为宿主，表达的外源蛋白能够进行正确的蛋白加工和修饰；病毒本身基因组大，容纳量高，而且能够携带多个基因；这些优点使得BEVS 成为一项成熟、安全、经济、高效的蛋白质表达技术，广泛用于生物防治、临床医疗、药品开发等领域[1ˉ3]。本研究构建重组杆状病毒载体后，将p53 基因转染至该载体，并调控其在肝癌细胞特异表达，为临床实现p53 基因精准治疗肝癌奠定基础。现将结果报道如下。

    1.资料与方法

    1.1 细胞培养及复苏

    实验所用细胞株为HepG2、LO2，按细胞培养方法进行培养及冻存。

    1.2 p53 过表达载体构建

    1.2.1 细胞总RNA 提取及逆转录 取适量HepG2、LO2 细胞置于Trizol 裂解液(索莱宝，R1100)中，按照说明书进行总RNA 提取后，按照逆转录试剂盒PrimeScript ? RT Master Mix 说明书进行逆转录操作，所得cDNA 置于ˉ20℃保存待用。

    1.2.2 过表达质粒载体pB513Bˉ1 提取以及纯化 使用质粒小量提取试剂盒(Solarbio,D1100)提取质粒，按照说明书完成质粒提取以及纯化。

    1.2.3 PCR 体系和反应条件 使用引物扩增基因CDS区域外源片段。反应体系和PCR 扩增条件参照说明书执行，引物由上海生工设计 ......