巴戟天—牛膝醇提物对SD大鼠软骨细胞G1/S周期蛋白与基因表达影响的实验研究(1)
【摘 要】目的：探究巴戟天-牛膝醇提物(M-AAE)对体外培养的SD大鼠软骨细胞G1/S周期蛋白与mRNA含量表达的影响，为其防治骨关节炎的临床应用提供依据。方法：①用乙醇加热回流法获得其醇提物成分；采用机械-酶消化法分离SD大鼠膝关节处的关节软骨，建立体外培养细胞模型并进行鉴定；②MTT法检测M-AAE对软骨细胞增殖特性的影响，使用倒置相差显微镜镜下观察软骨细胞状态；③PCR、Western blot法分别检测体外培养大鼠软骨细胞经M-AAE的0，75，150，300 μg·mL-1 DMEM溶液干预48 h后的mRNA、蛋白含量的表达。结果：①软骨细胞经Ⅱ型胶原法染色后，阳性对照组胞浆区域浸染为棕黄色；②经MTT检测M-AAE对软骨细胞增殖具有一定的时效-量效关系，其最佳干预时间和浓度分别为48 h和150 μg·mL-1；③M-AAE干预软骨细胞后，各加药组细胞周期蛋白依赖性激酶-4(CDK4)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)的mRNA与蛋白含量的表达量均明显高于0 μg·mL-1组 ......
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