赵 帅，李庆玲，韩 旭，刘小龙，王楚盈，李玉梅，张大方

    (长春中医药大学研究生院，长春130117)

    据世界卫生组织统计，心脑血管疾病已成为威胁人类生命健康的重要因素之一，其发病率仍在逐年攀升，病死率一直位居榜首。随着科技的进步，大量中外学者对心脑血管疾病的研究不断细化、深入，由于体内神经和内分泌系统的调节，在体模型很难准确地反映出致病因素对心肌细胞损伤的影响。而体外心肌细胞培养具有条件可控、样本均一、费用经济、便于观察与记录等优势[1]，近些年来常被用于药物或因子对心肌细胞损伤的研究中，填补了在体模型的不足。因此，找到适用于实验的离体心肌细胞损伤模型至关重要。现就离体心肌细胞损伤模型简要论述如下。

    1 缺氧复氧损伤模型

    心肌细胞缺氧复氧损伤模型是目前离体心肌细胞培养领域应用频率最高的心肌细胞损伤模型之一。此模型适用于体外模拟临床治疗缺血性心肌病所导致的缺血再灌注的病理损伤。该模型的优势在于排除体内其他因素干扰，可直观的观察条件或药物对受损心肌细胞的形态、功能、代谢等的影响，更确切的推断出药物的作用机制，是筛选临床抗心肌缺血再灌注损伤药物的最佳模型。但值得注意的是，单纯的缺氧损伤并不等同于临床上心肌缺血再灌注损伤，还要配合缺糖模型，以模拟心肌缺血的状态。目前制作缺氧复氧损伤模型分物理、化学两类方法。

    1.1 物理缺氧法 最常见的建立缺氧复氧模型的方法是由WEBESTER K W等[2]改进而来的混合气体培养法。这种方法用D-Hank's液取代培养液，并将细胞放于密闭容器内通入含95%N2和5%CO2的混合气体培养来建立缺氧环境，而后用含小牛血清的DMEM替换D-Hank's液，放回含5%CO2的培养箱中复氧。李丽静等[3]使用无菌自制密闭容器，用Earle's液替换培养液，通入95%N2与5%CO2混合气体，经2 h缺氧培养后复氧，并对细胞存活率、细胞凋亡率及Beclin-1蛋白表达量进行了检测，从而证明了参附汤血中移行成分对缺氧复氧损伤的心肌细胞有保护作用。刘哲等[4]使用5%CO2加95%N2混合气体与无血清低糖DMEM培养液置于培养箱中模拟缺氧环境2 h，再于含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液、5%CO2环境中复氧，用于研究西洋参皂苷对缺血再灌注损伤的影响。魏璨等[5]将高纯度N2直接通入低糖DMEM培养液中达到饱和，再放入5%CO2培养箱中培养2 h，复氧时直接将缺氧的培养液换为含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液继续培养24 h即可。

    另有研究者沿袭KOYAMA等[6]方法配制缺氧(缺血)液和复氧(再灌)液以建立缺氧复氧损伤模型[7] ......