李帅军，才可新，张楠楠，孙天霞，赵 雨，曲 毅,2*

    (1.长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心，长春 130117;2.吉林省食品药品安全监测中心，长春 130033)

    人参亲环素蛋白原核表达及其抗真菌活性

    李帅军1，才可新1，张楠楠1，孙天霞1，赵雨1，曲毅1,2*

    (1.长春中医药大学中医药与生物工程研究开发中心，长春 130117;2.吉林省食品药品安全监测中心，长春 130033)

    摘要：目的研究人参亲环素蛋白(pgCyP)体外抗真菌活性。方法采用RT-PCR技术,扩增人参cyclophilin(pgCyP)基因片段，构建原核表达质粒并转入大肠杆菌中，利用IPTG诱导表达目的蛋白，通过亲和纯化获得pgCyP蛋白，纸片扩散法验证目的蛋白的抗菌活性。结果人参CyP基因全长为522个碱基,编码174个氨基酸；目的蛋白经纯化后,SDS-PAGE分析显示单一条带;抑菌试验表明该重组蛋白可明显抑制疫霉菌菌丝的生长。结论成功克隆并表达具有抗菌活性的pgCyP蛋白,为进一步研究pgCyP在人参抗真菌中的作用机制奠定了基础。

    关键词：亲环素；人参；原核表达；纯化；抗真菌活性

    目前，人们已经从植物中分离出了许多抗菌蛋白如几丁质、亲环素、防御素凝集素和脂质转移蛋白等[1-6]。亲环素(CyP)是一类免疫因子，可以和免疫抑制剂环孢素A特异性结合[7]，广泛存在于各种生物体，具有PPIase活性，能催化Xaa-Pro肽键异构化，在多种生理活动中发挥重要的作用[8]。目前已发现亲环素对多种真菌具有抑制能力，许多亲环素类抗真菌蛋白已经从黑脐豆、绿豆、白菜和鹰嘴豆等植物中鉴定获得[9-11]。本研究通过构建人参亲环素原核表达载体，并针对目的蛋白进行抗疫霉菌生物活性研究，为今后人参抗病害研究提供技术支撑。

    1材料

    1.1材料5年生人参(PanaxginsengC.A Meyer)样品采自吉林省抚松县人参种植产业基地；大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α、BL21(DE3)本实验室保存；人参疫病(Phytophthora cactorum)由吉林农业大学中药材学院韩梅教授提供并鉴定；载体pGEX-6p-1由吉林大学生命科学院提供；Ni-chelating sepharose FF购自美国GE公司 ......