赵学正，高伟，唐保永，郑思化，李利军

    (杭州市西溪医院 骨科，浙江 杭州 310023)

    放疗是骨肉瘤综合治疗重要辅助治疗之一，术后和术前放疗的临床应用极大改善了骨肉瘤患者预后，然而目前使用的放疗增敏剂多是化疗药物，其发挥放疗的增敏作用的同时也表现出同化疗一样的不良反应，因此开发增敏作用强、不良反应小的新型放疗增敏剂便成为临床的研究热点之一[1]。 研究报道金雀异黄素(genstein，GEN)对放疗具有增敏效果，可显著提高放疗对肿瘤的治疗作用，而5-羟基-4’-硝基-7-丙酰氧基金雀异黄素(5-hydroxy-4’-nitro-7-propionyloxy-genistein，HNPG)是GEN的一种新型衍生物，在体外具有更强的抗肿瘤、抗氧化等作用[2-3]，然而其对放疗是否有增敏作用尚未见报道。本研究通过检测亚毒性浓度HNPG对亚毒性剂量的X线照射骨肉瘤Saos-2细胞的增敏作用，并进一步探究其可能的分子生物学机制，为HNPG对骨肉瘤的临床治疗提供实验依据和理论基础。

    1 材料和方法

    1.1 细胞培养和实验试剂 人骨肉瘤Saos-2细胞购自中国科学院上海生科馆细胞资源中心，用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37 ℃含5% CO2的饱和湿度的培养箱中进行培养。HNPG由第二军医大学生化实验室金永生教授合成赠送，分子式：C18H13O7N，相对分子质量：355，浅黄色粉末，纯度98%。所有照射均在室温下进行，采用医用直线加速器(Elekta Synergy，Elekta CompactTM，瑞典)照射，X线能量6 mV，剂量率6 Gy/min，源皮距SSD 100 cm，照射野10 cm×10 cm，于细胞上方加培养基至厚度为1.5 cm，使剂量建成在细胞层上，垂直照射。一抗bcl-2(A00040-1)、bax(A00183)、cyt-c(BA0774)、cleaved-caspase-3(BM3937)和GAPDH(A00227-1)购自美国BOSTER生物技术有限公司。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD，A001-3)、过氧化氢酶(catalase，CAT，A007-1-1)、谷胱甘肽(glutathione，GSH，A006-1)、ROS(E004-1-1)和丙二醛(malondialdehyde，MDA，A003-4)测定试剂盒购自南京建成生物研究所。Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(C0162)和线粒体膜电位检测试剂盒(C2006)购自上海碧云天生物公司 ......