张佳凤，赵辉，何平，郝亚琳，董琼娜，金晓杰

    上海交通大学医学院附属仁济医院 耳鼻咽喉科，上海 201112

    鼻咽癌是头颈部的上皮性恶性肿瘤，在东南亚尤其是华南地区发病率较高[1]。鼻咽癌的标准治疗方法是放疗，同时进行辅助化疗[2-3]。然而，标准治疗只有在早期治疗鼻咽癌时才有效。当疾病发展到晚期时，局部复发和化疗耐药是导致死亡的主要原因[4]。虽然鼻咽癌与人类EBV感染密切相关，但研究发现，环境致癌物、诱导性遗传因素以及AKT/mTOR通路等的异常激活，都会影响鼻咽癌的转化和发展[5]。因此，针对这些重要通路的治疗策略将有利于更好地开展鼻咽癌的临床治疗。

    槲皮素是一种植物性黄酮苷类化合物，被用作营养补充剂，并可预防癌症等各种疾病的发生[6]。越来越多的研究揭示了槲皮素的生物和药理活性，且发现其可选择性抑制癌细胞增殖，发挥促进细胞凋亡作用[7]。槲皮素可抑制膀胱癌、乳腺癌、结肠癌等多种癌细胞增殖和迁移，发挥抑癌作用[8]。多项研究也在细胞水平发现，槲皮素可抑制鼻咽癌细胞增殖，诱导凋亡[9-10]。尽管已通过体外细胞实验发现槲皮素可抑制鼻咽癌细胞增殖，但其具体的分子作用机制尚不清楚。本研究拟通过细胞实验和动物实验，探索槲皮素对鼻咽癌5-8F细胞增殖的影响，并进一步用荧光定量PCR和Western blot检测槲皮素对鼻咽癌细胞中AKT/mTOR通路的影响。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 药物与试剂：DMEM培养液和胎牛血清购自美国Gibco公司；槲皮素、胰蛋白酶、青链霉素购自美国Sigma公司；BCA法蛋白浓度检测试剂盒购自广州鼎国生物公司，TRIzol购自美国Life公司，反转录试剂盒与荧光定量PCR检测试剂盒购自大连宝生物公司。AKT和mTOR基因引物均由生工生物工程(上海)股份有限公司设计合成。MTT和实验中所使用抗体(AKT多克隆抗体、mTOR多克隆抗体、β-actin单克隆抗体和辣根过氧化物标记的二抗)以及RIPA蛋白裂解液均购自上海碧云天生物技术公司。

    1.1.2 细胞与动物：人鼻咽癌5-8F细胞由中科院上海细胞库提供 ......