胡琳雅，洪承吕，陈潜，何文斐，吴建章

    1.温州医科大学 药学院，浙江 温州 325035；2.温州医科大学附属第一医院 心血管内科，浙江 温州 325015

    研究表明，氧化应激是多种心血管疾病的重要病理机制，外界刺激诱使机体中产生过量的ROS，介导组织和细胞中脂质、DNA和蛋白质氧化损伤，进而导致强烈的炎症反应和细胞死亡(焦亡、凋亡和坏死)[1-3]。而心脏作为高能量需求器官，极易受到氧化损伤[4]。

    查耳酮类化合物是一类低毒的药食同源的天然产物，具有抗氧化[5]、抗炎[6]、抗肿瘤[7]和抗真菌[8]等广泛的生物活性。本课题组前期研究发现查耳酮衍生物L2H24能通过抗氧化和抗炎作用改善脑缺血再灌注损伤和急性肺损伤[9-10]，而L2H24能否在氧化应激相关的心肌细胞损伤中发挥保护作用及其分子机制尚未可知。本研究探讨了L2H24对大鼠心肌细胞H9c2的保护作用，旨在阐明其对H2O2刺激所致细胞氧化应激和焦亡的影响及潜在的分子机制，以期为心肌氧化损伤的治疗提供新的候选抗氧化剂。

    1 材料和方法

    1.1 材料 本研究所用化合物L2H24由本课题组的化学实验室合成，结构见图1[9]。大鼠心肌细胞H9c2购于中国科学院，DMEM(1 g/L)培养基、胎牛血清、0.25%含EDTA胰酶、PBS缓冲液、双抗(10 000 U/mL) 购于美国Gibco公司，MTT噻唑蓝购于北京索莱宝生物科技有限公司，结晶紫染色液、MDA检测试剂盒、细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒购于上海碧云天生物技术公司，多聚甲醛、TBHQ(食品抗氧化剂)、30% H2O2购于上海阿拉丁试剂有限公司，一抗HO-1、Nrf2、IL-1β购自美国Santa公司，β-actin、GAPDH购于武汉三鹰生物技术有限公司，Caspase-1、抗兔、抗鼠二抗购于美国CST公司，Lipofectamine 2000购于美国Invitrogen公司，小干扰RNA(si-Nrf2)序列购于上海吉玛制药技术有限公司，CO2恒温培养箱购于美国Thermo公司，倒置荧光显微镜购于日本Nikon公司，酶标仪、ChemiDocTMXRS+凝胶成像仪器购于美国Bio-Rad公司。

    图1 L2H24的分子结构

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：H9c2细胞用DMEM(1 g/L)基础培养基加10%的胎牛血清、1%的双抗的完全培养基培养 ......