王静,苏东风,李岩松,邰旭辉2,李迪,刘雨萌

    (中国人民解放军北部战区空军医院,辽宁 沈阳 110042 1 神经内科； 2 耳鼻喉科)

    帕金森病(PD)病人多见黑质中多巴胺能神经元的选择性丢失[1-2]，但不清楚此过程的发病机制。已发现Alzheimer病(AD)病人体内氧化应激反应过度增强以及神经炎症和凋亡级联反应的激活[3]，且在PD的多巴胺能神经元变性中起关键作用[3-5]。α-共核蛋白(α-synuclein)异常积聚所参与引起的神经系统变性疾病统称为共核蛋白病，包括PD和AD等，表明α-synuclein可能在PD等神经退行性疾病中起作用[6]。聚集体的α-synuclein蛋白是PD的病理学标志物[7]，且在PD病人运动障碍发生前能够检测出α-synuclein表达[8]。已有研究结果显示，抑制α-synuclein的表达有助于改善砷诱导的多巴胺细胞PC12的凋亡[9]，表明α-synuclein有潜力成为PD诊疗的关键靶点之一[10]。然而，α-synuclein对多巴胺能神经元氧化应激的影响仍不明确。因此，本文通过在体外多巴胺能神经元细胞中过表达α-synuclein，研究α-synuclein对细胞损伤、炎症、氧化应激的作用，旨在为PD病人认知障碍的治疗提供新靶点和新思路。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    多巴胺能神经元细胞MES23.5(MZ-1693，明舟生物，宁波)；胎牛血清(Thermo Fisher Scientific，美国)；DMEM/F12培养基(Sigma-Aldrich)和2’，7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFDA，D6883，Sigma-Aldrich)(Merck KGaA，美国)；共聚焦显微镜(Carl Zeiss LSM 700 Meta，Zeiss，德国)；超氧化物气化酶(SOD)活性检测试剂盒(S0109)和RIPA裂解缓冲液(碧云天生物技术研究所，上海)；酶联免疫吸附试验(ELSIA)试剂盒(CSB-E08556m, 华美生物，武汉)；BCA蛋白测定试剂盒(Bio-Rad Laboratories，美国)；α-synuclein抗体(ab52168，Abcam，美国)；B淋巴细胞瘤-2基因蛋白(Bcl-2)抗体(05-826)和Bcl-2相关x蛋白(Bax)抗体(MAB4601)(EMD Millipore，美国)；兔抗小鼠IgG-辣根过氧化物酶二抗(sc-358914，Santa Cruz Biotechnology ......